在生命科学的广阔领域中,单细胞分析技术正以超高的精度揭示着生命的奥秘。近期,一篇题为《Single-Cell Lipidomics - An Automated and Accessible Microfluidic Workflow Validated by Capillary Sampling》的文章,在单细胞脂质组学研究领域引起了广泛关注。文中使用的单细胞可视化分选系统—isopick解决了微流控技术表征脂质组学时面临的一系列难题,可以实现高通量、高自动化的单个活细胞分离。同时,该技术与液相色谱-质谱还具有良好的兼容性,让本实验从细胞培养—单细胞准确分选—单个活细胞中的脂质测量全链路成为可能,为单细胞脂质组学分析技术开辟全新通路,引导该领域迈向准确化、高效化、智能化新纪元。
为将单个细胞从悬浮液中分配到单个腔室中,作者利用isoPick系统在培养皿上创建单独的细胞腔室GRID,在6厘米培养皿上创建256个单细胞腔室GRID阵列,通过isoPick系统将细胞悬液(每毫升约15000个细胞)自动转移到GRID腔室中。然后可视化地在每个GRID腔室中确定是否是单个细胞。根据保存的位置坐标,isoPick系统自动将单个细胞分配到预定的位置(如96孔板或PCR管中)。整个分选过程温和,能够确保细胞的存活率。
对分选出的单细胞使用适当的溶剂和提取方法进行裂解处理,以确保脂质的完整性和可检测性。随后,将提取的脂质样品送入质谱仪(如LC-MS)进行检测。根据质谱数据,分析脂质种类、含量和分布等信息。比较不同细胞间的脂质特征,揭示细胞间的异质性。使用适当的软件进行数据处理和分析,如峰检测、峰匹配和定量等,并通过脂质组学数据,揭示其在细胞生理、病理过程中的作用和意义。
isopick平台,作为iotaSciences推出的一款模块化系统,在单细胞分析中展现出了优异的性能。该平台集成了流体处理器(isoPick)、显微镜(isoHub)和成像系统,能够实现对单个细胞的准确操控和观察。在《Single-Cell Lipidomics》的研究中,isopick平台发挥了至关重要的作用,帮助研究人员实现了对单个活细胞的快速、准确采样,为后续的脂质组学分析奠定了坚实基础。
研究人员利用isopick平台,结合微流控技术,构建了一个自动化的单细胞脂质组学工作流程。通过优化各项参数,如使用无胎牛血清的培养基、稀释的人源白蛋白缓冲液以及以磷酸盐缓冲液(PBS)进行细胞分配等,显著提高了脂质检测的效率和准确性。与传统的毛细管采样方法相比,优化后的微流控方法不仅保持了相似的脂质检测性能,还大幅提高了采样速度,使得整个工作流程更加高效、便捷。
为了验证isopick平台在单细胞脂质组学分析中的可靠性,研究人员还将其与毛细管采样方法进行了直接比较。通过主成分分析(PCA)等统计方法,作者发现使用isopick平台和毛细管采样方法获得的单细胞脂质谱具有高度的相似性。这一结果不仅证实了isopick平台在单细胞采样方面的准确性,也为其在单细胞脂质组学研究中的广泛应用提供了有力支持。
随着单细胞分析技术的不断发展,单细胞脂质组学将在更多领域展现出其巨大的应用潜力。例如,在药物发现过程中,通过探究药物对单个细胞脂质代谢的影响,可以更加准确地评估药物的疗效和安全性;在疾病研究中,通过分析感染细胞与未感染细胞、癌细胞对辐射的局部响应等方面的脂质代谢差异,可以为疾病的治疗提供新的思路和方法。
萨里大学化学系的梅拉妮·贝利 (Melanie Bailey) 教授表示:“自从一年多前我们首次报告了与 iotaSciences 合作研发的 isoPick? 仪器取得的初步鼓舞性成果以来,双方合作持续取得进展,对此我们深感欣慰。目前,我们已掌握一种自动化且易于操作的工作流程,可在单细胞层面研究细胞脂质代谢,从而加深我们对脂质相关疾病的理解,并推动开发有针对性的治疗干预措施。”
isopick平台凭借其优异的性能和可靠性,在单细胞脂质组学研究中发挥了重要作用。它不仅提高了脂质检测的效率和准确性,还为研究人员提供了一个更加高效、便捷的工作流程。随着技术的不断进步和应用领域的不断拓展,我们相信isopick平台将在未来为生命科学领域带来更多惊喜和突破。
除本文中提到的单细胞可视化分选系统—isopick,英国iotaSciences公司研发推出的单细胞可视化分选培养系统—isoCell可确保分离出的细胞为单细胞且可以直接对分离出的单细胞进行高度自动化地单克隆细胞系培育,成活率高达60%以上,且通过全流程可视化监控,保证每一个单克隆细胞系均来自于挑选的单个细胞。isoCell分选、培养条件温和,可以显著提高单细胞克隆的存活率。同时isoCell可以将单细胞样品按照特定的体积直接转移到96孔板或PCR管中,无缝衔接单细胞下游应用,确保后续单细胞组学信息完整性。
左)单细胞可视化分选系统—isopick;右)单细胞可视化分选培养系统-isoCell
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