GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定

原理

试样中残留的四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物，用Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液提取， 亲水亲脂平衡型固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。

6.1 试料的制备 取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。

关键词：发热、回收率

要点：

在样品制备时，粉碎的时间如果太长，发热严重的话会对回收率有影响（如四环素类的金霉素），具体参照GB/T 30891-2014 中附录B 的要求制样。

8.1 提取 称取试料1 g （精确至±0.01 g），加Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液8 mL，涡旋1 min，超声20 min，-2°C 10 000 r/min离心5 min，收集上清液。残渣中加磷酸盐缓冲液8 mL，重复提取一次，合并两次提取液，混匀，备用。

关键词：提取次数2次

要点：

Ø  标准品中用了2次提取，两次提取用的提取液是不一样的。

第1次采用Mcllvaine-Na2EDTA，此缓冲液是提取四环素类兽残的常用试剂，

但有几个在磺胺类药物单纯用Mcllvaine-Na2EDTA提取回收率不理想，第2次提取用了Mcllvaine-Na2EDTA+磷酸盐缓冲液，对于磺胺类药物有较好的回收率。

关键词：低温

要点：

在提取过程中降低离心的温度至-2℃可以更好的限制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于样品的提取转移。

5.5 材料 亲水亲脂平衡型固相萃取柱：200 mg/6 mL，或相当者关键词：亲水亲脂平衡型固相萃取柱

要点：

Ø  国标中净化材料的是亲水亲脂平衡型固相萃取柱，也就是我们平时用的HLB小柱 200 mg/6 mL（纳鸥科技，PN:AN60A005），HLB小柱表面同时具有亲水性和疏水性基团，对各类极性、非极性化合物具有较均衡的吸附作用。

其吸附能力和样品容量是 C18 键合硅胶的 3~10 倍，许多在 C18 难以得到保留的强亲水性化合物，在HLB 上仍有较好的回收率。

8.2 净化  固相萃取柱依次用甲醇 5 mL 和水 5 mL 活化，取备用液过柱，依次用水 5 mL 和20%甲醇水溶液 5 mL 淋洗，抽干，用洗脱液 10 mL 洗脱。收集洗脱液，45℃水浴氮气吹干。 加入复溶液 1.0 mL，涡旋 1 min 溶解残余物，14000 r/min 离心 5 min，微孔滤膜过滤，液相色谱-串联质谱测定。

关键点：氮吹

要点：

Ø  建议控制氮吹时间、温度和流速。实验过程氮吹时间非常长，约60分钟，容易造成部分化合物回收率偏低（比如：四环素类、青霉素类）。

Ø  建议氮吹至100 μL 左右，不氮吹干，可以减少在氮吹过程中部分目标化合物的损失。

关键词：溶剂效应

要点：

Ø  复溶时，加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目标化合物的峰型，降低溶剂效应，同时提高部分化合物的回收率。

Ø  此外，在色谱柱前加一个小配件（溶剂效应消除器，PN：AN80C037），可较好解决由于样品溶剂和流动相不匹配而造成的溶剂效应问题，使峰形更好，响应更高。

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