RNA提取的质控标准及经典案例分享！建议先收藏！

人体一个细胞含RNA约10pg（含DNA约7pg）。在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA含量低，占细胞总RNA的1%~5%。核糖体RNA特点含量高，占细胞总RNA的80%~85%。

表1.RNA的结构和功能

信使RNA是RNA的一种，主要功能是将DNA上的遗传信息传递到蛋白质合成机器——核糖体上，从而实现蛋白质的。信使RNA的结构简单，一般由一条单链RNA组成。mRNA的长度差异较大，

哺乳动物的mRNA长度一般在5×10²～1×10⁵个核苷酸，这种长度的差异使得mRNA能够携带更多的遗传信息。

mRNA的寿命相对较短，它们在完成遗传信息的传递任务后，就会被降解。这种短暂的寿命保证了生物体在生长发育过程中，能够根据需要及时调整蛋白质的合成，从而适应不断变化的环境。细菌mRNA的平均半衰期约为1.5分钟，而脊椎动物mRNA的半衰期则差异较大，平均约为3小时。一个完整的mRNA包括5'端帽、5'非翻译区、编码区、3'非翻译区和poly(A)尾链。

这些评估方法看似很简单，大家都熟记在心，但是在实际操作中，往往会遇到各种问题，无法分辨出提取的RNA质量的好坏，下面给大家分享几个典型案例：

此图中的提取的RNA为非常完美的RNA，28S：18S的的比例在2：1左右，5S的条带清晰，同时28S和18S附近有弥散的背景荧光，为mRNA。因此，注意啦，28S和18S附近有弥散的背景荧光不是降解！不是降解！

虽然每个细胞基因表达是成千上万条基因，但是每种基因转录成的 mRNA 非常少，全部 mRNA 加起来只占总 RNA 的1%-5%。所以，一般跑电泳，不能直接看到 mRNA 条带，跑电泳的时候表现是弥散在以 28S和18S(核蛋自体 RNA)为中心，整个泳道上的上下尾带，或者说弥散涂抹带。它是几千种不同 mRNA(每种都很微量)的集合，因为每一条带都很微量，所以，只能看到整个泳道的上下拖尾，弥散涂抹带，或者说形成泳道的背景荧光。

通常，我们用柱式法提取的RNA电泳时，只能看到两条清晰的条带，是不是5S RNA降解了呢？

并非降解！左图为提取的非常完美的RNA。离心柱型的硅胶模，一般不吸附小片段的 5s 片段，这样，提取出来的 5s应该非常淡，或者看不清楚，如果有部分降解，降解后的片段一般会正好位于 5s这个位置（如图右），因此离心柱型的，都不应该见到明显很亮的 5s，见到了就是 28s和18s降解来的小片段。

提取的RNA琼脂糖凝胶电泳之后，胶图上显示三条清晰的条带，这时候是不是感到窃喜，“三条带都在，RNA提取的很好吧”

NO！NO！NO！是部分降解了，28s是首先降解，28s条带变淡，而部分降解首先是降解成较小的 18s左右的片段，因此 18s条带明显变粗，造成 28s:18s的比例≤1。然后在不该看到条带或者应该是很弱的 5s 位置，出现了较明显的 5s 大小的降解带。

当提取完RNA之后，用nanodrop定量，浓度在一百多以上，此时是不是在想，“浓度挺好的”，但是 RNA的质检一定要看电泳条带，有可能电泳后发现已全部降解，nanodrop浓度都是虚高。

如图所示，虽然RNA浓度还可以，但是提取的两个RNA样本是完全降解了，28，18s 两条带都看不见了。最后降解成的小片段正好和 5s 大小一致，所以在 5s 位置看到了大量的一条浓浓的降解小片段，和 5s 一样大小。因此，RNA质控时，一定不能只能浓度，要看电泳图！

判断 RNA 是否降解的最重要的标准:

第一、 判断28S:18S(原核生物是23S:16S)比例是否正常， 在2:1(1.5~2.5:1)左右，即是否是 28S 亮度比 18S 亮度大，越大越好，如果 28S 只是比 18S 稍高，或者亮度差不多，即使条带清晰，也已经提示部分降解了;相反，如果因为染色或者电泳的问题导致看起来条带模糊，但是只要 28S:18S 比例正常，还是 28S比 18S 亮，比例也正常，那无论28S 和 18S 条带是否模糊，都不是降解。它只是因为电泳或者染色不好，导致了条带看起来不清晰，模糊而已(甚至照相调焦距不对，都会造成条带模糊，这并不是降解)。这当然不是降解。

第二、用安捷伦2100检测RIN值大小。RIN值范围为1到10，值越大，RNA完整性越高。

不同RIN值代表的RNA完整性

核酸提取原理简单，但是如果要获得完整性好、纯度高的RNA，需要在配方上反复打磨，采用最优质的柱膜等。的RNA提取试剂盒拥有行业领先技术，11分钟完成组织的RNA提取，采用一根柱子实现RNA吸附和DNA清除，超强防RNA降解配方，任何环境下操作都能获得完整的RNA，每年＞50万人份的销量，几乎0售后！是一款真正硬核的产品！