前 言
赛多利斯Ambr250系统是一种高通量、自动化的生物反应器系统,用于工艺开发,配备12个或24个并行的100-250 mL迷你生物反应器,适用于细胞培养和微生物发酵实验。该系统还可进一步升级,配备多个整合的分析仪器,为您的培养结果增添更多价值。此前,Vi-CELL XR细胞计数仪已能完全整合到Ambr15细胞培养和Ambr250高通量生物反应器中,在培养实验期间自动提供活细胞密度和活率数据。这些结果可在无需操作人员值守的情况下实现额外的工艺控制。
现在,通过将Vi-CELL BLU细胞活率分析仪整合到赛多利斯Ambr250高通量系统中,可进一步增强整合的细胞计数和活率测量能力。Vi-CELL BLU细胞计数仪具备Vi-CELL XR细胞计数仪的所有优势,但测样时间更短,取样体积更小。此外,整合的Vi-CELL BLU细胞计数仪也可用于独立的测量,便于进行质量控制检查,从而提高赛多利斯Ambr250高通量生物反应器数据与其他(接种)培养物数据之间的可重复性。
将Vi-CELL BLU细胞计数和活率分析仪整合到赛多利斯Ambr250高通量系统中,充分发挥了两种仪器的优势,为用户提供了自动化细胞培养处理和分析的优势。这两种技术的结合为研究人员和生物工艺工程师带来了诸多益处,例如实时培养监测和增强的数据分析,同时节省了宝贵的时间和资源。自动化细胞培养分析有助于优化工作流程,并可能提高细胞培养的放大性。
在本应用短文中,我们提供了在赛多利斯Ambr250高通量系统中进行的细胞培养数据,这些培养每天都在整合的Vi-CELL BLU细胞计数仪上进行测试,以在线确定细胞浓度和活率。这些结果与离线独立测试的结果进行了比较。整合的Vi-CELL BLU细胞计数和活率分析仪安装在Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG (Biberach, Germany) 。本应用短文中显示的数据是在其设施中进行整合测试时获得的。我们感谢Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG及其员工的成功合作。
方 法
在Beta测试期间,赛多利斯Ambr250高通量系统中的12个生物反应器分别用来自不同预培养的细胞进行了接种。这些培养进行了长达13天的连续补料分批培养,并且每天取样以确定细胞浓度和活率。
首先,使用完整系统进行了预定的整合细胞活率测定;赛多利斯Ambr250高通量系统会取出样品,并将其添加到固定支架上的样品杯中,以便Vi-CELL BLU细胞计数仪进行测量。
随后切断Vi-CELL BLU细胞计数仪与赛多利斯Ambr250高通量系统之间的网络连接,并将Vi-CELL BLU作为独立设备使用,以确定所有12个生物反应器的细胞浓度和活率。将整合和独立测量的值进行了比较,以确定它们之间的相关性。
所有测量均在正常分析模式下运行(200μL样品体积),并使用针对所用细胞优化后的Cell Type进行分析。在整个实验过程中,无论是整合方法还是独立方法,细胞浓度和活率均作为单次测量(N=1)进行确定。然后,样品被稀释了2倍或4倍以适应高浓度样品的分析。对于整合的Vi-CELL BLU细胞计数仪,这些稀释操作是在将细胞悬浮液添加到样品杯之前,由赛多利斯Ambr250高通量系统完成的。随后,为每个生物反应器制作了培养图表,比较了在线测量的活细胞密度(VCD)和活率与独立的Vi-CELL BLU细胞计数和活率分析仪的结果。使用浓度0.5M和10M的浓度质控品对Vi-CELL BLU细胞计数仪在独立模式下的性能进行了验证。
结 果
在实验开始前,通过一次测量0.5M和10M一次性浓度质控品,验证了Vi-CELL BLU细胞计数仪的性能。测得的总细胞密度(分别为0.51×10?个/mL和10.19×10?个/mL)在范围内,并且呈现出完美的线性相关性(图1,趋势线强制通过(0,0))。
图1:在Vi-CELL BLU细胞计数和活率分析仪的独立模式下运行的浓度质控品。观察到完美的线性相关性。趋势线强制通过(0,0)
在培养实验过程中获得的结果如图2所示。所有12个生物反应器都呈现出相似的生长曲线,观察到在第4天之前生长迅速,随后大多数培养物进入平台期,活率保持在90%以上,直至第10天。在实验的最后几天,活率开始下降。
总体而言,在线数据与独立模式下获得的数值非常相似。重复测量或许有助于排除由不准确的稀释、移液或混合等引起的随机异常值。与独立模式下的数值相比,在所有测量中,整合下的活细胞密度的平均偏差为-5.2%,而活率的平均偏差仅为0.8%。
图2:在Vi-CELL BLU细胞计数和活率分析仪上整合检测(红色)和独立检测(蓝色)数值的比较。在12天或13天的培养过程中,显示了活细胞密度(VCD,实线)和活率(虚线)
结 论
Beta测试的结果显示,在整合的Vi-CELL BLU细胞计数和活率分析仪上进行的自动化细胞浓度和活率测量之间,存在小于5.2%的偏差,具有很强的一致性。所有12个生物反应器的生长曲线都显示出两种方法具有非常相似的趋势。能够在整合的系统和独立系统之间轻松切换,使得可以定期使用Vi-CELL BLU质量控制产品进行性能检查。
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