多种细胞计数和活率检测影响因素的评估

分析检测的细胞

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细胞接种或做其他实验之前的细胞换洗和浓缩过程中，离心和重悬是常用的方法。一般认为CHO细胞是比较好生长的，但有时它们也会有特别的生长要求，需要专门的培养基才能很好地生长。譬如，以下实验中的CHO细胞通过1000g离心5min后（相对温和的离心），在培养基或PBS缓冲液中重悬，然后评估不同细胞制备条件对细胞计数和活率分析结果的影响。

结果显示：在推荐的培养基中离心和重悬对这种CHO细胞没有明显的影响。但是在PBS缓冲液中重悬对这种CHO细胞活率的影响很大，和平均细胞直径一样都明显变小。同时，细胞浓度也有一些降低，可能是在重悬过程中对细胞造成了损伤。在PBS中的第二次离心和重悬对该细胞活率和直径继续产生负面的影响。

EL4细胞通常被认为是易碎的，而且即使在理想条件下生长也比较缓慢，并且活率一般<70%。我们制备了EL4细胞后分装到96孔板中。细胞类型使用哺乳动物细胞参数，只是混合次数有所差异。目的是评估增加混合后细胞受到混悬和离心破坏的影响有多大。

根据EL4细胞的测试结果（如上表所示）可以看到：总细胞计数，总细胞浓度和直径都没有怎么变化，而活细胞数随混合次数增加逐渐下降，因而细胞活率也相应下降。这表明对于这类细胞，减少吹打混悬和台盼蓝混合次数可能会更适合，过多的混匀吹打需要避免。

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3.1 SF昆虫细胞

即使在理想条件下SF9细胞生长要达到高密度也不容易，通常活率都在60%以下。因此96孔板测试导致仪器检测总时间延长，可能会对排在后面的待测细胞产生负面影响。我们使用了标准昆虫细胞的参数在96孔板上对SF9昆虫细胞进行了评估。

结果显示在测试的3小时过程中，细胞活率没有检测到有大的影响，细胞直径也没有太大变化，但如果细胞死亡或膨胀，这两个参数是会改变的。虽然活率较低，但在离开细胞培养环境后比较长时间内并没有不利影响，所以这些细胞足够强壮。

3.2 HELA细胞

让HELA细胞生长成高度融合状态产生胁迫效应，然后对细胞收集并重悬分散。再将细胞分装到96孔板中，通过标准哺乳动物细胞类型测试得到分析结果。96孔板按每列的顺序依次检测，从而保证每行之间细胞检测间隔时间是一致的。

注意到96孔板后面的样品得到稍微更高的浓度。同时更多的研究发现，随着时间的增加细胞的平均直径会逐渐变大。

通过观察得到的细胞图像发现，细胞数量的增加看上去是膨胀或气泡，同时还伴有许多非细胞颗粒。虽然通过细胞分析参数设置，后者（非细胞颗粒）通常不会对细胞计数产生影响，但它们可能被计数为小细胞。膨胀效应导致在3小时的检测时间中（96孔板）平均细胞直径增加大概10%，而且可能导致低于Z小直径阈值的小细胞也被统计到计数结果中。