不同类型细胞的计数和活率分析及影响因素评估

细胞接种或做其他实验之前的细胞换洗和浓缩过程中，离心和重悬是常用的方法。

一般认为CHO 细胞是比较好生长的，但有时它们也有特别的生长要求，需要专门的培养基才能达到很好地生长。以下实验中，细胞通过1000g 离心5分钟（相对温和的离心）后，在培养基或缓冲液中重悬，然后评估样品制备对细胞活率的影响。

结果显示：在推荐的培养基中离心和重悬对CHO 细胞没有明显的影响。但是，在PBS 缓冲液中重悬对细胞活率影响较大，并且平均细胞直径也明显下降。同时，细胞密度也有一些小的减少，可能是重悬过程中损耗的。在PBS 缓冲液中的第2次离心和重悬对细胞活率和细胞大小也产生了负面影响。

EL4 细胞通常被认为是易碎的，即使在理想条件下生长也很缓慢，并且活率<70%。我们制备了EL4 细胞后，分装到96 孔板中。细胞类型使用哺乳动物细胞参数，只是混合次数有差异。目的是评估增加混合次数后细胞受到混悬和离心破坏的影响有多大。

结果显示：总细胞计数和密度及细胞直径都没有怎么变化，但活细胞数随混合次数增加逐渐下降，因而细胞活率也相应下降。这表明对于这类细胞，减少样品吹打混悬和台盼蓝染色混合次数可能会更适合，过多的吹打混匀需要避免。

即使在理想条件下SF9细胞生长要达到高密度也不容易，通常活率都在60%以下。

因此通过96孔板上测试使得检测时间延长，以此评估可能对细胞产生的负面影响。我们使用了标准昆虫细胞的参数在96 孔板上对SF9昆虫细胞进行了检测。

结果显示：在检测的3个小时过程中，细胞活率没有大的影响，细胞直径也没有太大变化，但如果细胞死亡或膨胀，这两个参数是会变化的。虽然活率较低，但在离开细胞培养环境后比较长时间内并没有不利影响，所以这些细胞足够强壮。

为了胁迫细胞，HELA细胞生长成高度融合状态，然后收集并重悬分散。将HELA细胞分装到96 孔板中，通过哺乳动物细胞参数测试得到分析结果。96 孔板按每列测试，从而保证每行之间细胞检测间隔时间是一致的。我们注意到96孔板后面的样品得到稍微更高的密度。更多的研究发现：随着时间增加，细胞的平均直径会逐渐变大。

通过检测得到的细胞照片发现，细胞数量的增加看上去是膨胀或气泡，同时还伴有许多非细胞颗粒。虽然通过细胞分析参数设置，后者（非细胞颗粒）通常不会对细胞计数产生影响，但它们可能被计数为小细胞。膨胀效应导致平均细胞直径在3小时的检测时间内增加了差不多10%，可能导致低于最小直径阈值的更小的细胞，统计到细胞计数中。