突破性进展：DxFLEX 11色单管方案实现多发性骨髓瘤MRD精准检测

多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma,MM）是第二常见的血液系统恶性肿瘤，约占血液系统肿瘤的10%。在过去十年中，多药联合治疗显著改善了MM患者的预后，使约50%的患者达到完全缓解。然而，传统的缓解评估标准（如完全缓解CR、非常好的部分缓解VGPR）已无法满足临床需求，因为即使达到CR的患者，体内仍可能存在10^-6-10^-9肿瘤细胞。更敏感的微小残留病（Measurable Residual Disease,MRD）监测应运而生，成为MM患者治疗反应评价和预测预后的关键工具。

流式细胞术（Flow Cytometry）作为MRD检测的核心技术之一，灵敏度高、多参数、检测速度快等特点。2016年国际骨髓瘤工作组（IMWG）将MRD状态纳入缓解标准，NCCN指南和中国多发性骨髓瘤诊治指南在2017年已经将MRD阴性和持续MRD阴性作为疗效判断标准和MM治疗的最好疗效。MM一线治疗后MRD阴性已成为总生存期和无进展生存期最强的替代标志物之一，并被用作多项临床试验的主要终点。

多参数流式细胞术（MFC）检测MM MRD的核心原理是基于异常免疫表型来区分正常和异常浆细胞。正常浆细胞具有特定的免疫表型特征，而MM细胞在分化过程中会发生免疫表型异常，表现为某些抗原的过表达、低表达或缺失。通过多色抗体组合，可以在单个样本中多维分离各种细胞群，对任何异常细胞群进行检测和跟踪。

• 空白限（Limit of Blank,LOB），LOB通过染色不含浆细胞的骨髓样本确定背景事件数。LOB的计算方法为：用MM MRD方案中除浆细胞标志物（如CD138）外的所有抗体染色骨髓样本，在预期会出现异常浆细胞的“空区域”设置多个门，计算这些门中检测到的平均细胞数。LOB=空白平均值+1.645×标准差。

• 最低检出限（Limit of Detection,LOD），LOD定义为能够可靠检测到的最小异常细胞群体。根据IMWG建议，最小群体需要≥20个事件才能可靠地与空白限区分开来。LOD的计算公式为：LOD=LOB+1.645×低浓度样本的标准差。

• 最低定量限（Lower Limit of Quantification,LLOQ），是根据IMWG的建议通过稀释测定获得的。为了确定LLOQ，将含有病理性浆细胞的样本以健康供体骨髓样本进行连续稀释（10^-3至10^-5）。LLOQ设定在事件数量大约为50个细胞且变异系数（CV）不超过30%的稀释度。

• 为达到MRD分析最低检测灵敏度10^-5的共识建议，获取至少5×10^-6个细胞。部分高灵敏度方案要求获取1×10^-7个细胞，可将检测灵敏度提高至10^-6水平。

传统流式方案通常采用“骨架抗体+异常标记物”的组合策略。CD38、CD138、CD19、CD56、CD45构成浆细胞肿瘤的“骨架”抗体，用于初步界定浆细胞群体。在此基础上，增加CD117、CD81、CD27、CD200等异常标志物，提高异常浆细胞的识别能力。胞浆轻链染色是确定克隆性的关键步骤，通常在表面抗体染色后进行胞内染色。

核心标记物的表型及在浆细胞中的表达情况汇总如下：

在2024年发表的《基于骨髓样本的多发性骨髓瘤微小残留病检测中国专家共识（2024年版）》中对检测浆细胞肿瘤的MRD抗体8-10色组合进行推荐：

最近，发表在Cytometry B的《在临床常规中实施单管流式细胞术组合方案以检测多发性骨髓瘤患者的MRD》这篇文章中介绍了采用Beckman Coulter DxFLEX检测的11色方案组合。组合方案如下：

11色MRD方案的检测限

11色MRD方案与10色常规浆细胞方案的检测结果对照

1.中华医学会血液学分会实验诊断学组、浆细胞疾病学组,中国医师协会多发性骨髓瘤专业委员会. 基于骨髓样本的多发性骨髓瘤微小残留病检测中国专家共识（2024年版）[J]. 中华血液学杂志,2024,45(06)：534-541.

2. Deutsch-Biedermann K, Hefler-Frischmuth K, Gruber J, et al. Implementation of a one-tube flow cytometry panel for measurable residual disease detection in multiple myeloma patients in clinical routine.Cytometry B Clin Cytom.  2025.

3. 中国医师协会血液科医师分会、中华医学会血液学分会. 中国多发性骨髓瘤诊治指南（2024年修订））[J]. 中华内科杂志,2024,63(12)：1186-1195.