以下是为您整理的犬白介素18(IL-18)ELISA试剂盒实验使用说明书,内容涵盖实验原理、操作流程及注意事项。
犬白介素18(IL-18)ELISA试剂盒采用双抗体夹心法原理进行检测。其核心机制是通过特异性抗体与目标抗原的结合反应实现定量分析。具体过程包括:首先将抗犬IL-18的捕获抗体包被于微孔板表面形成固相载体;随后加入待测样本,样本中的IL-18会与固相抗体特异性结合;再加入酶标记的检测抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物;通过底物显色反应(如TMB),在HRP酶催化下产生颜色变化,其显色强度与样本中IL-18浓度呈正相关。该技术具有高灵敏度(可检测pg/mL级别蛋白)和强特异性(双抗体设计有效排除交叉反应)的特点,适用于血清、血浆、组织匀浆等多种样本中IL-18的定量。
BS-4413 犬白介素18(IL-18)ELISA试剂盒
实验操作流程
样本准备
血清/血浆:使用无热原试管采集,EDTA或肝素抗凝,3000 rpm离心10分钟取上清。
组织匀浆:按重量加入PBS(pH 7.4)匀浆,3000 rpm离心10分钟取上清。
保存条件:短期(48小时内)2-8℃保存,长期需-20℃分装,避免反复冻融。
试剂配制
洗涤液:浓缩洗涤液按1:20比例用蒸馏水稀释。
标准品:用标准品稀释液梯度稀释(如125-8000 pg/mL范围)。
检测步骤
加样:每孔加入50μL标准品或样本,37℃孵育30分钟。
洗涤:弃去液体,用洗涤液洗板5次,拍干。
酶标抗体:每孔加入50μL酶标检测抗体,37℃孵育30分钟。
显色:加入TMB底物液50μL,避光孵育15分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,立即测定OD值(450nm)。
结果计算
通过标准曲线拟合,根据样本OD值计算IL-18浓度。
注意事项
仪器要求:需配备450nm酶标仪及精准加样器(0.5-1000μL)。
操作规范:避免气泡干扰,孵育时用封板膜密封微孔。
质控建议:每批次实验需设置空白孔和重复孔以确保数据可靠性。
以上内容详细说明了犬IL-18 ELISA试剂盒的操作规范,如需进一步优化实验方案或补充其他物种的检测方法,可提供具体需求。
注意:以上仅供参考,实验需严格遵循试剂盒说明书,避免交叉污染,并确保样本处理(如离心、稀释)符合要求。
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