“会发光”的定点标记蛋白：助力体内CAR-T从概念验证突破临床试验研究

十年前，CAR-T疗法因其在血液肿瘤中的惊艳疗效而震动医疗届，但其漫长的体外制备周期和百万元一针的高昂价格让患者望而止步。尤其是CAR-T在实体瘤领域的举步维艰，更是限制了其可扩展性和可及性。为何患者的“救命稻草”遥不可及呢？

为克服以上瓶颈，体内（in vivo）CAR-T技术快速兴起。该技术通过病毒载体或纳米递送系统将CAR基因直接导入患者T细胞，实现原位编程、扩增和功能化，省去体外加工步骤，患者可即时接受治疗。将天价打下来，体内CAR-T的费用预估将是传统的1/10，在普惠性方面带来根本性改善，且免除化疗预处理，也会让危重患者受益。

现在，体内CAR-T技术已从概念验证走向临床试验。CAR-T细胞的动态分布、扩增效率、功能持久性、药代动力学等精准检测，直接关系剂量优化、安全性评估及疗效预测。义翘神州创新性推出“会发光”定点标记重组蛋白，为体内CAR-T研发提供高效分析工具。

一、In vivo CAR-T：“即用现货型”范式转换

体内（In vivo）CAR-T细胞疗法的核心是直接向患者体内注射携带CAR基因的载体，并通过基因编辑优化和精准的靶向策略，提升治疗特异性及降低毒性。体内CAR-T无需抽血和体外培养，经过静脉注射，病毒或脂质纳米颗粒载体如同“生物导-弹”在体内精准识别并改造T细胞或其它免疫细胞，使其原位转化为能够杀伤肿瘤细胞的CAR-T细胞，具有“即用现货型”的便捷性和可扩展性。

体内CAR-T技术流程示意图

（源自文献：doi: 10.1038/s41392-025-02269-w）

体内CAR-T技术将传统的体外CAR-T“精英疗法”转变为“普惠方案”。以患者自身为“细胞工厂”，流程简单，1-3天即可完成治疗，传统CAR-T需要7-22天。载体可批量生产、冻存储存，具有通用型（Off-the-Shelf）属性，预计规模化生产能将成本降低50-90%，未来有望降至万元。体内CAR-T技术无需健康T细胞，无需清淋预处理，CRS风险显著降低，适用人群更广。

二、In vivo CAR-T：从实验室到临床研究

目前，全-球尚无体内（In vivo）CAR-T产品获批上市，该技术正处于概念验证到早期临床开发的关键期。In vivo CAR-T于2017年首次完成概念性验证，截止2025年底，全-球范围已超过30项体内CAR-T临床试验在进行，且已发表首批临床数据，标志着In vivo CAR-T技术的临床转化进入重要的里程牌。

1，血液系统恶性肿瘤

2025年7月2日，Lancet发表了首-个采用in vivo CAR-T细胞治疗多发性骨-髓瘤的临床数据。ESO-T01由EsoBiotec（阿斯利康子公司）和普瑞金合作开发，利用具备免疫屏蔽功能的慢病毒载体，搭载靶向BCMA的人源化单域抗体。数据显示针对复发/难治性多发性骨-髓瘤（RRMM），4例患者客观缓解率（ORR）达100%，观察到可控的细胞因子释放综合征（CRS），未检测到神经毒性（ICANS），初步验证了安全性。

Interius的靶向CD20的INT2104项目和Umoja的靶向CD19的UB-VV111，已经进入临床Ⅰ期试验，适应症分别为B细胞恶性肿瘤和血液肿瘤。

2，实体瘤

体内CAR-T是突破实体瘤微环境屏障的全新尝试。通过精准局部给药，如卵巢癌腹腔给药或胶质母细胞瘤脑室内给药，使肿瘤部位的CAR-T细胞富集，减少全身毒性。联合生物材料或纳米载体，共递送IL-12、TGF-β等免疫调节分子，逆转免疫抑制微环境。目前已在胃癌、黑色素瘤、肾癌等多种实体瘤中进行探索。

CREATE Medicines开发的MT-302利用包裹在脂质纳米颗粒（LNP）中的mRNA，在体内重编程循环免疫细胞，使其表达靶向TROP2的CAR，在实体瘤模型中显示出向肿瘤组织浸润及激活干扰素信号的能力，但2025年11月7日公布的临床试验结果不佳。

3，自身免疫性疾病

In vivo CAR-T真正的爆发点也许是自身免疫性疾病。传统CAR-T已在系统性红斑狼疮（SLE）、重症肌无力（MG）、类风湿关节炎（RA）、多发性硬化（MS）等自免疾病中表现出良好效果，但由于流程复杂、成本高昂，100万元的治疗费用让患者宁可忍受疾病的痛苦。In vivo CAR-T完美的规避了这个问题，既保留了CAR-T的治疗优势，同时又大幅降低治疗负担和安全风险。AbbVie、Sanofi等大厂率先将In vivo CAR-T重点布局在自免而非肿瘤，也是对这一逻辑的认可。

目前，In vivo CAR-T临床研究主要针对B细胞介导的自免疾病，如用CD19 CAR-T或BCMA CAR-T治疗SLE、MG等。2025年9月18日NEJM（新英格兰医学杂志）在线发表全-球首次基于脂质纳米颗粒（LNP）体内CAR-T治疗SLE的临床研究结果，5名患者全部有效，或终结终身服药。研究发现CAR-T细胞在6小时达到峰值，2-3天后“功成身退”（回归基线），90%以上的CAR都表达在目标CD8+ T细胞上。副作用可控，未出现3-4级细胞因子释放综合征和神经毒性，没有肝损伤，总体比传统CAR-T安全。Capstan、Immorna、Shenzen MagicRNA等多家公司已启动针对自身免疫病的临床试验。

三、In vivo CAR-T：关键考量

CAR-T疗法已在癌症和自免疾病的治疗中展现疗效。尽管前景广阔，In vivo CAR-T在精准靶向、安全控制及实体瘤微环境适应性方面仍面临严峻挑战。

靶向特异性是基础，需通过抗CD3或抗TCR配体等受体介导策略，让递送系统只转导所需的免疫细胞亚群。递送载体的选择和设计要结合治疗场景，考虑有效载荷类型（如mRNA、DNA、Cas9）和生物分布。转基因设计需搭配免疫细胞特异性启动子和优化的CAR结构，还要通过MHC-I敲除、CD47过表达等策略降低免疫原性，避免载体被免疫系统识别。安全性监测要重点关注细胞因子释放综合征（CRS）、免疫效应细胞相关神经毒性综合征（ICANS）和插入突变等风险。了解CAR-T细胞的体内动力学，包括扩增、组织分布和持久性，能为给药剂量和治疗窗口提供依据。严格的监管和转化规划，包括经过验证的临床前模型、质量控制和临床试验终点，也至关重要。

体内CAR-T在临床应用中的关键考量

（源自文献：doi: 10.1016/j.xcrm.2025.102337）

体内CAR-T通过革新递送系统与CAR设计，克服了传统体外CAR-T的核心瓶颈，在血液肿瘤、实体瘤、自身免疫性疾病和感染性疾病等多个领域展现出巨大应用潜力。未来，体内CAR-T有望实现靶向效率翻倍、成本大幅降低。

同时体内CAR-T技术的临床开发面临着独特的挑战。细胞的动态分布、扩增动力学、功能持久性及脱靶效应的精确监测，直接决定剂量优化、安全性评估与疗效预测。传统检测方法受限于灵敏度不足、背景信号干扰及标准化困难，难以满足从临床前研究到商业化质控（CMC）的严苛要求。

四、定点标记蛋白赋能CAR-T精准分析

义翘神州深耕药物靶点试剂开发18年，依托近万种重组蛋白产品库与技术积累，创新性推出“会发光”的定点标记重组蛋白，为体内CAR-T研发提供高分辨分析工具：

· 高活性：在特定位置标记，远离活性功能区的小标签上标记，不干扰蛋白活性。

· 高特异性：标记仅发生于小标签上，无其它背景。

· 高稳定性：标记数量确定，不影响蛋白结构，保持蛋白天然构象。

· 高一致性：批内高度均质性，批间高度一致性。

定点标记蛋白经流式细胞术检测可特异性识别相应CAR细胞，满足不同研究需求，如细胞药物质控和检测、抗体筛选、蛋白互作研究等，显著提升检测的灵敏度、特异性与准确性，已成为细胞治疗制品质量控制与特性分析的核心工具，为加速细胞治疗药物的临床转化与产业化进程提供关键技术支撑。

免责声明：义翘神州内容团队仅是分享和解读公开的研究论文及其发现，专注于介绍全-球生物医药研究新进展。本文仅作信息交流用，文中观点不代表义翘神州立场。随着对疾病机制研究的深入，新的实验结果或结论可能会修改或推翻文中的描述，还请大家理解。

本文不属于治疗方案推荐，如需获得治疗方案指导，请前往正规医院就诊。

【参考文献】

1. Zugasti, I. et al. CAR-T cell therapy for cancer: current challenges and future directions. Sig Transduct Target Ther, 2025. https://doi.org/10.1038/s41392-025-02269-w

2. Yan-Ruide Li and Lili Yang, From bench to body: In vivo CAR engineering in the clinic. Cell Reports Medicine, 2025. https://doi.org/10.1016/j.xcrm.2025.102337

3. Huang Y, et al. In vivo CAR-T cell therapy: new breakthroughs for cell-based tumor immunotherapy. Hum Vaccin Immunother. 2025. doi:10.1080/21645515.2025.2558403.

4. Bot A, et al. In vivo chimeric antigen receptor (CAR)-T cell therapy. Nat Rev Drug Discov. 2025. doi:10.1038/s41573-025-01291-5.

5. Xu J, et al. In vivo CAR cell therapy: from bench to bedside. J Hematol Oncol. 2025. doi:10.1186/s13045-025-01759-2.