维生素作为人体必需的营养物质，在代谢过程中起着重要生理作用。但由于部分维生素存在异构体(如维生素D、维生素E、维生素C等)，且不同构型的生理作用和生物活性也有所差异。因此在实际测试中，需要根据项目要求，实现各异构体含量的分别测定或不同构型的合并定量。因此，为了获得良好的峰形和分离效果，色谱柱的选型以及合适的方法条件在此类项目中起着关键作用。
小编整理了一些涉及维生素异构体的分析案例以供大家参考，大家也可以将自己在维生素检测项目的小窍门分享在留言里，精选后有好礼相送。希望各位奋战在一线的食品安全守护者，都能收获理想的数据结果。
维生素C
HPLC分析条件(GB 5009.86-2025新国标版)
仪器：Shimadzu LC-20AD
色谱柱：Shim-pack GIST C18-AQ(150mm x 4.6mm, 5μm, PN: 227-30742-07)
柱温: 25 ℃
检测波长: UV 265 nm
流速: 1.0 mL/min
进样量: 10 μL
流动相：等度洗脱，量取900 mL水于烧杯中，吸取40%TBAH溶液3.25 mL、称取乙酸铵3.85 g加入水中，用冰乙酸(约3.14 mL)调pH至4.5~5.0.然后加入TCEP 50 mg，再加入乙腈10 mL，最后加水稀释至1L混匀，超声5 min，除去气泡。
小贴士
测定复杂样品时，为避免干扰定量，建议换用长柱(250mm x 4.6mm, 5μm)或小粒径(150mm x 4.6mm, 3μm)，以提高分离。
标准品色谱图(5 μg/mL)
维生素A & 维生素E
HPLC分析条件(GB 5009.82-2016)
色谱柱：SHIMSEN VD C30(250mm x 4.6mm, 3μm, PN: 380-01000-01)
柱温：20 ℃
检测波长：维生素A为325nm；维生素E为294nm；
流速：0.8 mL/min
进样量：10 μL
流动相：A-水；B-甲醇
梯度洗脱程序如下
0 | 13 | 20 | 24 | 24.5 |
2 | 2 | 0 | 0 | 2 |
98 | 98 | 100 | 100 | 98 |
小贴士
①由于维生素A(视黄醇)易降解，建议优先购买小规格标准品，配置成储备液后，多瓶分装于棕色非预切口小瓶中，冷冻保存(-20℃)。单次开封使用，使用前需进行标定，保证失效前使用。
②采用C30色谱柱分析维生素E异构体时，应保持较低柱温(20-25℃)，夏季或室温较高时，需要提前检查柱温箱是否正常控温。
标准品色谱图
样品色谱图-婴儿配方乳粉
HPLC分析条件(α-生育酚手性拆分)
仪器：Shimadzu LC-20AD
色谱柱：Opti-Chiral-C1-5(4.6 x 150 mm, 5μm, PN: CT-21554)
柱温: 35 ℃
流速: 1.2 mL/min
进样量: 20 μL
检测器：PDA 294 nm；荧光激发波长 294 nm，发射波长 328 nm
流动相： A： 水 B： 乙腈：甲醇=3:1(V/V)，梯度洗脱
梯度洗脱程序如下
0 | 23 | 32.5 | 35 | 39 | 39.5 |
25 | 25 | 20 | 0 | 0 | 25 |
75 | 75 | 80 | 100 | 100 | 75 |
标准品色谱图（荧光检测器，不同浓度）
维生素D
HPLC分析条件
仪器：Shimadzu Nexera XR
色谱柱：ShimNex S-C18-PAH (3 μm, 4.6×150 mm; P/N：380-01247-14)
柱温：35 ℃
检测波长：UV 264 nm
流速：0.4 mL/min 进样量：100 μL
流动相：等度洗脱，95%乙腈-水：甲醇=40：60
小贴士
对皂化液进行液液萃取时，应控制振摇力度，避免出现乳化层，影响回收率。采用正相硅胶柱净化时，应避免。
标准品色谱图(100 ng/mL)
2D-HPLC分析条件(GB 5009.296-2023第二法)
仪器：Shimadzu Nexera 二维液相系统
一维色谱柱：ShimNex HE C8(4.6×150 mm, 5 μm, PN: 380-01241-08)
捕集柱：Shim-pack GIST C18-AQ(4.0×10 mm, 5 μm, PN: 227-30763-02)
二维色谱柱：ShimNex S-C18-PAH(4.6×150 mm, 3 μm, PN: 380-01247-14)
进样体积：10 μL
柱温: 35 ℃
检测器波长：VA 325 nm, VE 294nm, VD 264nm
一维流动相：A相-水，B相-甲醇，C相-乙腈
二维流动相：A相-乙腈，B相-异丙醇，流动相梯度 & 流速参考二维液相配置
小贴士
建议采用补集柱富集一维流出组分后，再切入二维进行分析，避免溶剂效应影响峰形和定量。
标准品色谱图(不同浓度)
LC-MS/MS分析条件(GB 5009.296-2023第三法)
仪器：Shimadzu Nexera LC-30AD + LCMS-8050
色谱柱：ShimNex S-C18-PAH(3 μm, 2.1×100 mm; P/N 380-01247-09)
柱温：35 ℃
流速：0.4 mL/min
进样量：10 μL
流动相： A: 5 mM甲酸铵水溶液+0.05%甲酸；B: 5 mM甲酸铵甲醇溶液+0.05%甲酸
梯度洗脱程序如下
0 | 0.5 | 1 | 3 | 3.1 |
10 | 5 | 0 | 0 | 10 |
90 | 95 | 100 | 100 | 90 |
质谱条件
离子化模式：ESI，正离子扫描
扫描模式：多反应监测 (MRM)
碰撞气：氩气
加热气：10 L/min(Air)
雾化气：3 L/min(N2)
干燥气：10 L/min(N2)
接口温度：300 ℃
DL温度：400 ℃
加热模块温度：400 ℃
各化合物MRM参数略
小贴士
采用大规格HLB小柱进行离线前处理，可实现皂化液直接上柱，便于批量操作（SHIMSEN Styra HLB, 200mg/6mL, PN: 380-00855-10)。
标准品及内标的MRM谱图(不同浓度)
胡萝卜素
HPLC方法(GB 5009.83-2016条件一)
仪器：Shimadzu LC-40D XR
色谱柱：SHIMSEN VD C30(250mm x 4.6mm, 3μm, PN: 380-01000-01)
柱温: 30 ℃
流速: 1.0 mL/min
进样量: 20 μL
检测器波长: 450 nm
流动相：A相: 甲醇: 乙腈: 水=73.5: 24.5: 2(体积比) B相：甲基叔丁基醚
梯度洗脱程序如下
0 | 15 | 18 | 19 | 20 |
100 | 59 | 20 | 20 | 0 |
0 | 41 | 80 | 80 | 100 |
标准品色谱图
样品色谱图-婴儿配方乳粉
HPLC方法(GB 5009.83-2016条件二)
仪器：Shimadzu LC-40D XR
色谱柱：Shim-pack GIST C18-AQ(250mm x 4.6mm, 5μm, PN: 227-30742-08)
柱温: 35 ℃
流速: 1.5 mL/min
进样量: 20 μL
检测器波长: 450 nm
流动相：三氯甲烷: 乙腈: 甲醇=3: 12: 85， 含抗坏血酸 0.4 g/L，等度洗脱
小贴士：采用条件二进行分析时，可适当调整流速、柱温，以保证β-胡萝卜素异构体合并出峰，便于定量计算。
标准品色谱图(10 μg/mL)
叶黄素
HPLC方法(GB 5009.248-2016)
仪器：Shimadzu LC-40D XR
色谱柱：SHIMSEN VD C30(250mm x 4.6mm, 3μm, PN: 380-01000-01)
柱温: 30 ℃
流速: 0.8 mL/min
进样量: 20 μL
检测器波长: 445 nm
流动相：A相: 甲醇:水=98: 2(V/V) B相：甲基叔丁基醚(含0.1%BHT)
梯度洗脱程序如下
0 | 18 | 18.1 |
100 | 10 | 100 |
0 | 90 | 0 |
标准品色谱图(2 μg/mL)
具体实验条件可扫码查阅相关应用案例，案例相关产品汇总如下：
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