一块96孔板可检测一千多个样本？荧光编码+光谱流式，让高通量磷酸化检测效率倍增

双色编码：给细胞贴上“光谱身份证”

蛋白条形码的核心思路是在抗体染色之前，先用NHS酯类染料（Pacific Blue和DyLight800）与细胞内蛋白质共价结合，为不同样本打上专属的荧光“标签”。通过精心设计的4×4浓度矩阵，两种染料即可组合出16个互不重叠的光谱标签（图1）。

将16组荧光编码标记的样本混合后作为一个整体进行后续的PE/APC标记的磷酸化抗体染色，上机后利用CytoFLEX mosaic 88的光谱解析能力，软件自动将混合信号“解复用”，还原每个原始样本的真实磷酸化表达水平。

光谱分离有多干净？

eGFP、PE、APC完全不受干扰

条形码方案最大的顾虑是：编码染料会不会“污染”目标检测通道？从光谱图来看，得益于CytoFLEX mosaic超宽的波谱检测范围，Pacific Blue（~450 nm发射峰）在短波长与DyLight800（近红外~800 nm）长波长分别占据可见光谱的两端，完美避开了eGFP（~510 nm）、PE（~575 nm）和APC（~660 nm）的发射窗口（图2）。

实际数据也验证了这一点：无论样本条形码组合如何，eGFP报告基因表达强度和PE/APC磷酸化抗体染色信号均保持高度一致，说明条形码标记过程对后续免疫染色没有任何干扰。

检测通量跃升，抗体消耗减量

这套工作流的“降本增效”能力直接拉满：

CytoFLEX mosaic 88：

让光谱解析成为高通量标配

写在最后

对于从事信号通路磷酸化研究、药物高通量筛选、免疫细胞功能监测的实验室来说，蛋白条形码+光谱流式的组合拳无疑是一剂“生产力猛药”。

它用极低的试剂成本换取了极大的通量提升，而且无需额外购买昂贵的专用编码试剂盒——Pacific Blue和DyLight800均为常规流式染料，门槛极低。

CytoFLEX mosaic 88光谱检测模块正在让这种曾经专属于大型中心实验室的高端技术变得触手可及。