兔子神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　兔子神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-4164兔子神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒

　　1. 实验目的

　　本试剂盒用于定量检测兔子血清、血浆及相关液体样本中神经营养因子3(NT-3)的含量。

　　2. 实验原理

　　采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)技术。用纯化的NT-3抗体包被微孔板，加入样本后形成固相抗体-抗原复合物，再与HRP标记的检测抗体结合，经彻底洗涤后加底物TMB显色。显色深浅与样本中NT-3浓度呈正相关，通过酶标仪测定吸光度(OD值)计算浓度。

　　3. 试剂盒组成

　　微孔酶标板(96孔或48孔配置)

　　标准品(冻干品，需复溶)

　　样本稀释液

　　检测抗体-HRP标记物

　　20×洗涤缓冲液

　　底物A液(TMB)

　　底物B液(避光保存)

　　终止液

　　封板膜

　　自封袋

　　说明书

　　4. 实验前准备

　　试剂平衡‌：所有试剂和样本需在室温(18-25℃)平衡20-30分钟，避免37℃直接溶解。

　　标准品稀释‌：冻干标准品加入1mL标准品稀释液，室温静置10分钟并混匀，形成10,000pg/mL贮液。按说明书倍比稀释至所需浓度(如5,000pg/mL至78pg/mL)，0pg/mL作为空白对照。

　　洗涤缓冲液‌：20×浓缩液按1:19比例用蒸馏水稀释。

　　检测抗体‌：使用前离心或轻甩，按比例用检测稀释液稀释。

　　5. 操作步骤

　　加样‌：

　　设标准品孔(不同浓度梯度)、样本孔(待测样本50μL)及空白孔(不加样本和酶标试剂)。

　　使用加样器精确加样，避免交叉污染，封板膜一次性使用。

　　温育‌：37℃孵育30分钟(具体时间以说明书为准)。

　　洗涤‌：

　　手工洗板：甩尽液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后拍干，重复5次。

　　自动洗板：每孔注入350μL洗涤液，浸泡1分钟，洗板5次。

　　显色‌：每孔加底物A液和B液各50μL，37℃避光显色15分钟。

　　终止‌：每孔加终止液50μL，终止反应(颜色由蓝变黄)。

　　测定‌：30分钟内用酶标仪在450nm波长测OD值。

　　6. 注意事项

　　试剂保存‌：未开封试剂盒2-8℃避光保存;频繁使用时2-8℃，长期不用可-20℃保存。

　　洗涤液处理‌：浓缩洗涤液结晶时，水浴加热助溶，不影响结果。

　　加样控制‌：加样时间控制在5分钟内，避免误差;样本OD值过高时需稀释后测定。

　　安全操作‌：底物B液有毒且光敏感，避免接触;所有废弃物按传染物处理。

　　准确性保障‌：每次实验做标准曲线和复孔;避免不同批号试剂混用。

　　7. 结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

　　样本OD值代入标准曲线方程，乘以稀释倍数(如5倍)得实际浓度。

　　8. 性能指标

　　准确性‌：标准品线性回归与预期浓度相关系数R≥0.990。

　　灵敏度‌：检测下限通常小于0.1μmol/L。

　　特异性‌：不与类似结构物交叉反应。

　　重复性‌：板内、板间变异系数均小于15%。

　　9. 常见问题与解决方案

　　标准曲线异常‌：检查标准品稀释准确性、洗板彻底性、加样误差及读数准确性。

　　显色问题‌：确保底物避光保存，终止反应后及时读数。

　　注：以上仅供参考，本产品仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

　　兔子神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒实验使用说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴!本生试剂盒