鸡α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　鸡α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-4267鸡α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒

　　一、实验目的

　　本试剂盒用于定量检测鸡血清、血浆及相关液体样本中α干扰素(IFN-α)的含量，适用于科研实验，不可用于临床诊断。

　　二、实验原理

　　采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将抗鸡IFN-α单克隆抗体包被于微孔板，形成固相抗体;加入样本后，样本中的IFN-α与固相抗体结合;再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物;经彻底洗涤后加入底物TMB显色，TMB在HRP催化下转化为蓝色，并在酸作用下变为黄色。颜色的深浅与样本中IFN-α浓度呈正相关，通过酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值)，计算样本浓度。

　　三、试剂盒组成

　　微孔板：96孔(包被抗体)

　　标准品：原倍标准品(需稀释)

　　样本稀释液

　　酶标试剂(HRP标记抗体)

　　显色底物A、B(TMB)

　　终止液(酸性溶液)

　　洗涤液(20×浓缩液，需稀释)

　　封板膜

　　说明书

　　四、标本要求

　　1. 标本采集与处理

　　血清‌：使用无热原/内毒素试管，室温凝固后3000转离心10分钟，分离血清。

　　血浆‌：EDTA/肝素抗凝，3000转离心30分钟取上清。

　　保存‌：标本采集后尽早提取，-20℃保存避免反复冻融;室温解冻需确保充分混匀。

　　2. 注意事项

　　避免使用含NaN₃的样本，因NaN₃ yizhiHRP活性。

　　样本稀释：若OD值超出标准曲线范围，需稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

　　五、操作步骤

　　1. 试剂准备

　　试剂盒从冷藏环境取出后，室温平衡15-30分钟。

　　洗涤液：20×浓缩液用蒸馏水稀释至1×。

　　2. 加样

　　设空白孔、标准孔、待测样品孔。

　　标准品：50μl原倍标准品稀释液(按说明书图表稀释)。

　　样本：40μl样本稀释液 + 10μl样本(稀释5倍)。

　　3. 温育与洗涤

　　37℃避光孵育30分钟(具体时间以说明书为准)。

　　洗涤：每孔加洗涤液350μl，静置1分钟后弃去，拍干，重复5次。

　　4. 显色与终止

　　显色：每孔加底物A、B各50μl，37℃避光孵育15分钟。

　　终止：每孔加终止液50μl，终止反应(颜色由蓝变黄)。

　　5. 测定

　　加终止液后15分钟内，用酶标仪450nm波长测OD值。

　　六、结果计算

　　以标准品浓度(pg/mL)为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

　　样本OD值代入标准曲线方程，计算浓度，再乘以稀释倍数(如5倍)。

　　灵敏度：低可检测浓度通常为0.1-4 pg/mL(以试剂盒说明书为准)。

　　七、注意事项

　　试剂保存‌：2-8℃避光保存，有效期6个月;使用前平衡至室温。

　　操作规范‌：

　　避免试剂接触皮肤，终止液为酸性，操作时戴手套。

　　封板膜一次性使用，防止交叉污染。

　　底物避光保存，显色液出现绿色需混匀终止液。

　　质量控制‌：

　　每板设标准曲线，避免使用不同批号试剂混用。

　　洗涤彻底，避免高背景;酶结合物过量时检查稀释度。

　　废弃物处理‌：所有样本、洗涤液按传染物处理。

　　八、典型数据与性能指标

　　特异性‌：不与类似物(如其他细胞因子)交叉反应。

　　重复性‌：板内、板间变异系数<10%。

　　回收率‌：血浆/细胞上清样本加标回收率约90-114%。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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