大豆异黄酮是一类主要存在于大豆、黑豆等豆类中的生物活性物质,属于多酚类化合物,也是baojian食品中常见的功效成分,是大豆及其制品发挥baojian作用的关键物质。
根据GB/T 23788-2026,测定baojian食品中大豆异黄酮的方法是:高效液相色谱法。原理是试样中大豆异黄酮经80%甲醇溶液提取后,高效液相色谱分离,紫外检测器检测,以保留时间定性,外标法定量。
实验涉及标准溶液配制:
1.大豆异黄酮标准储备液(1000pg/mL):称取大豆苷(纯度≥98%)、大豆黄苷(纯度≥98%)、染料木苷(纯度≥98%)、大豆苷元(纯度≥98%)、大豆黄素(纯度≥98%)和染料木素标准样品(纯度≥98%)各25mg(精确至0.1mg,按标准样品纯度折算),用10mL规格的Miragen电动移液器分别加入10mL二甲基亚砜(色谱纯),超声至充分溶解,转移至25mL棕色容量瓶中,用甲醇(色谱纯)定容至刻度,混匀。在4°C冰箱中贮存,有效期3个月。
2.大豆异黄酮混合标准中间溶液:用5mL规格的Miragen电动移液器,设置分液体积:2.5mL,将大豆苷、大豆
黄苷、染料木苷三种标准储备液(1)分别置于10mL容量瓶中;再用1mL规格的Miragen电动移液器,设置分液体积:0.5mL,将大豆苷元、大豆黄素、染料木素三种标准储备液(1)分别置于10mL容量瓶中;以上6个容量瓶均用甲醇(色谱纯)定容至刻度,混匀。该大豆异黄酮混合标准溶液中大豆苷、大豆黄苷、染料木苷质量浓度分别为250μg/mL,大豆苷元、大豆黄素、染料木素质量浓度分别为50μg/mL。4°C冰箱中贮存,有效期3个月。
3.大豆异黄酮系列标准工作液:用20μL规格的Miragen电动移液器,移取0.02mL混合标准中间溶液(2)于5mL容量瓶中;再用5mL规格的Miragen电动移液器,单吸多排模式,设置4个分液体积:0.2、0.4、1.0、2.0mL,将4个体积的混合标准中间溶液(2)分别置于5mL容量瓶中(程序可存储和调用);以上5个容量瓶均用50%甲醇溶液[量取50mL甲醇(色谱纯),加水稀释至100mL,混匀。]定容至刻度,混匀,配制成大豆苷、大豆黄苷、染料木苷质量浓度分别为1.0、10.0、20.0、50.0、100.0μg/mL,大豆苷元、大豆黄素、染料木素质量浓度分别为0.2、2.0、4.0、10.0、20.0μg/mL。临用现配。
实验室移取小体积(几微升到10毫升)的液体,一般采用移液器。Miragen电动移液器,数值靠设定或选定,电机控制活塞运动,吸液和排液也更加稳定,还有步骤少、调数快、模式多等诸多优势。Miragen电动移液器还可给电机多段信号,从而达到吸液和排液分次数且各段体积可调,可实现单吸多排、多吸单排等效果,程序还可存储和调用,更加可靠、便捷。
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