显微图库 | 徕卡拍摄的多色图像

2024-09-19 17:26:48 126阅读次数

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用仪器拍摄的多图摄像

荧光多色显微技术是多重成像技术的一个方面，可在同一实验中观察和分析同一样本中的多种元素--每种元素都标记有不同的荧光染料。这不仅能提高实验效率，还能获得更可靠、更有意义的结果，从而了解细胞和组织内的复杂过程。本图集展示了使用THUNDER和STELLARIS平台获得的标有多种荧光探针的样本图像。

使用 STELLARIS 共聚焦

平台进行多色成像

STELLARIS共聚焦显微镜系列配备了新一代白光激光器（WLL）。搭配Power HyD检测器，STELLARIS可提供完全自由的光谱。您可以根据自己的研究需要进行多色实验，而不受仪器的限制。通过使用TauSense工具集，STELLARIS还可以利用荧光染料/蛋白质基于生命周期的特性，为多色成像增加一个新的维度。

用TauSTED对活细胞中的细胞骨架和细胞膜

进行成像

使用STELLARIS STED采集的图像。

< 点击换图 >

TauSTED 775解析了用SiR-tubulin（荧光 - Spyrochrome）标记的错综复杂的细胞骨架网络，以及用CF594（青色 - Biotium）标记的运输囊泡。

内吞途径和线粒体动力学

使用STELLARIS STED采集的图像。

用MitoView Green标记的线粒体。用CellBright NIR750标记的膜泡。使用TauSeparation，根据与囊泡内吞成熟相关的pH值成熟步骤进行寿命成分分离，揭示不同的内吞步骤。

用TauSTED对活细胞中的细胞骨架和细胞膜

进行成像

使用STELLARIS STED采集的图像。U2OS细胞上的活细胞TauSTED，使用了肌动蛋白（SiR-actin，荧光）、微管（SPY555-tubulin，青色）和膜（CF488A偶联WGA，绿色）标记。SiR和SPY可从Spirochrome购买。CF染料可从Biotium Inc.比例尺：10 微米。

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用TauSTED对活细胞中的细胞骨架和细胞膜进行成像。

拟南芥（Arabidopsis thaliana）的根-下胚轴交界处

拟南芥（Arabidopsis thaliana）的根-下胚轴交界处：肌动蛋白（Lifeact-Venus，Era 等人，植物细胞生理学，2009年）、叶绿体（内源性荧光）和细胞壁（碘化丙啶）。通过使用基于荧光寿命的信息，可以观察到肌动蛋白网络、细胞壁和叶绿体的复杂细节。图片使用TauContrast技术获取。样本由海德堡大学COS的Melanie Krebs博士提供。

揭示细胞骨架和线粒体之间的相互作用

用SiR-Actin（657 - 740 纳米检测范围）、AF750-Tom20（760 - 790 纳米）、AF790-Tubulin（810 - 850 纳米）标记的 Cos-7 细胞。

左图：传统砷化镓检测器所见。
右图：配备Power HyD R检测器的STELLARIS 8所见。光谱结果（右）显示了实验中使用的荧光团的激发光谱（灰色）和发射光谱（红色）。
样品提供：Jana D?hner 博士和 Urs Ziegler 博士。Urs Ziegler，苏黎世大学。

充分利用活细胞实验：更少曝光，更多信息

使用传统共聚焦显微镜对同一样本中的多个不同荧光标签进行成像时，通常需要对每个颜色通道进行顺序成像，以避免光谱串色而降低图像质量。在动力学实验中，这意味着由于获取每个时间点所需的时间增加，您可能会错过快速的动态事件。此外，样品在台上停留的时间更长，因此在实验过程中保持细胞健康更具挑战性。下图是用4种不同的荧光团标记的活体 HeLa 细胞拍摄的图像，用于识别细胞核、肌动蛋白、微管蛋白和质膜。有了STELLARIS，就可以一次性采集所有4个通道的图像，而不必对细胞连续成像4次。

TauSTED 775解析了用SiR-tubulin（荧光 - Spyrochrome）标记的错综复杂的细胞骨架网络，以及用CF594（青色 - Biotium）标记的运输囊泡。

LAS X Navigator--用于实验的GPS

上图：小鼠胚胎（如第 X 页所示）的201张拼接图像的详细视图（单张图像）。
(第 X 页所示）的细节图（单张）。透射光检测器（TLD）成像，通过488纳米、561纳米和660纳米的激发波长创建 RGB 叠加图像。
488nm、561nm和638nm波长的激发，生成RGB叠加图。
底部：与上述相同视场的TauContrast图像，最大投影展示。

以 "光速 "探索

用LIGHTNING对细胞内成分进行成像。

用STELLARIS 8采集的图像。
用AF488（微管，灰色）、SPY555（肌动蛋白，品红色）、MitoTrackerRed（线粒体内腔，绿色）、Atto 647N（TOM 20，线粒体，红色）和CF770 WGA（膜，青色）标记的U2OS细胞。