婴幼儿食品与乳品中5种核苷酸的HPLC分析

核苷酸（Nucleotide）是由含氮的碱基、核糖或脱氧核糖、磷酸三种物质组成的化合物。核苷酸是生物体内重要的低分子化合物，它的主要生理功能是参与人体的能量代谢、蛋白质合成，具有提高各种酶的活性、活化细胞功能、促进抗体形成、增强免疫功能的作用。

目前在婴幼儿配方奶粉中作为添加剂的核苷酸主要有5 种：胞嘧啶核苷酸(CMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、尿嘧啶核苷酸(UMP)、次黄嘌呤核苷酸(IMP)、鸟嘌呤核苷酸(GMP)。在现行的国家相应标准中，GB 14880-2012《食品营养强化剂使用标准》中规定，核苷酸的允许使用量为0.12 g/kg~0.58 g/kg（以核苷酸总量计）。

本应用是采用C18色谱柱TSKgel ODS-100V，参照食品安全国家标准GB 5413.40-2016对婴幼儿配方奶粉中的5种核苷酸进行分析测定。

溶液的配制

5种核苷酸混合标准溶液的配制：分别称取核苷酸标准品CMP、AMP、UMP各10 mg、GMP和IMP各5 mg（准确至0.1 mg），用超纯水溶解转移至同一个100 mL容量瓶中，用水定容至100 mL。

前处理步骤

称取混合均匀的固体试样约 5 g，于100 mL锥形瓶中，加入约0.2 g淀粉酶，加入20 mL热水（30 ℃~40 ℃）充分溶解试样，或称取混合均匀的液体试样约20 g于100 mL 锥形瓶中，加入约0.2 g淀粉酶摇匀，于37 ℃±2 ℃培养箱内酶解30 min。取出冷却至室温。 

待测液的制备：用醋酸溶液调试样溶液pH4.1，移入50 mL 容量瓶中，定容，滤纸过滤，所得滤液用0.45 μm微膜过滤备用。

分析条件

仪器：Agilent 1120 

色谱柱：TSKgel ODS-100V（5 μm,4.6 mm I.D.×250 mm） 

流动相：磷酸盐缓冲液+甲醇=94%+6% 

流速：1.0 mL/min 

柱温：25 ℃ 

检测器：紫外检测器 

进样体积：10 μL

结果与讨论

图1. 5种核苷酸混合标准溶液色谱图

图2. 奶粉样品溶液色谱图

总结：本应用是参照GB 5413.40-2016婴幼儿食品与乳品中核苷酸的方法，使用C18色谱柱TSKgel ODS-100V分别对5种核苷酸的混合标准溶液、奶粉样品进行分析测定。实验结果表明，在上述分析条件下ODS-100V可满足国标的测定要求。