20%成本撬动10倍转导滴度！推动慢病毒载体应用突破瓶颈

在后续的放大验证实验中，SPCL依旧展现优异的滴度水平。

在Cytiva中国科创中心，Fast Trak的上游科学家基于化学成分确定的基础培养基和补料培养基，分别在WAVE生物反应器和XDR10生物反应器上验证了SPCL良好的可放大性。

以CDM为基础培养基，将SPCL复苏于125 mL摇瓶中，培养体积30 mL。培养条件为37℃，170 rpm（振幅2.6 cm），CO₂浓度为8%。细胞接种密度为4 E+05 cells/mL，每3天传代一次，于P3代接种至WAVE以及XDR10生物反应器中。在WAVE生物反应器中继续培养4-5天，当细胞密度达到1 E+07 cells/mL时，添加诱导剂和补料开始产生慢病毒载体。在加入诱导剂后第二天再次加入相同体积的补料，并继续培养24小时后进行收获（图2）。

将慢病毒载体包装所需的Rev、Gag/Pol以及VSV-G基因以及分子开关稳定插入到HEK293T细胞的基因组中，经单克隆细胞筛选获得EuLV包装细胞系。该系统采用单个GOI质粒瞬转的方式进行LVV包装，适用于快速推进管线进程。在Cytiva中国科创中心，Fast Trak科学家们与深研生物一起对PCL的LVV包装性能进行了测试。

将PCL复苏于摇瓶中，每三天传代一次，适应两代以后进行慢病毒载体瞬转包装。细胞以4 E+05 cells/mL的密度接种于摇瓶，细胞密度达到4.5-5.5 E+06 cells/mL且细胞活率大于90%时，进行GOI单质粒瞬转。根据细胞培养体积制备质粒转染试剂复合物，PEI MAX的用量为5-6 μg/mL，GOI质粒的用量为2 μg/mL。将质粒转染试剂复合物缓慢加入到细胞培养摇瓶，将转染后的细胞放入37℃，8% CO₂的二氧化碳振荡培养箱中培养5~6小时。随后将摇瓶转移至生物安全柜中，加入8%培养体积的EuLV Inducer 04，放入37℃，8%CO₂的二氧化碳振荡培养箱中继续培养42小时。

培养结束后使用Vi-CELL进行细胞活率以及活细胞数量的检测。以1500 X g离心10分钟，收集离心上清液，慢病毒载体感染滴度检测使用流式法（FACS）。

检测结果显示（图6），使用基于PCL的单质粒瞬转工艺，慢病毒载体感染滴度可以达到2.1 E+08 TU/mL。相较于目前四质粒瞬转工艺平均感染滴度的2 E+07 TU/mL，使用基于PCL的瞬转工艺在感染滴度上提升了10倍以上。

慢病毒载体稳转细胞系降低病毒生产成本，显著提升新型疗法可及性。慢病毒载体作为已经经过临床验证的遗传信息递送载体，被广泛应用于包括细胞治疗、基因治疗等新型疗法中。然而当前使用四质粒瞬转工艺进行慢病毒载体生产，不仅增加了潜在批间差异性，更使得成本居高不下。Cytiva联合合作伙伴在中国推出慢病毒载体稳转细胞系，以20%成本造就10倍转导滴度，助力提升新型疗法可及性。