样品提取
1.1 草莓果酱
称取2g(精确至0.001g)试样于50mL离心管中,加入盐酸溶液(2.0mol/L)40mL,旋紧盖子,摇匀,置于沸水浴中加热30min,取出冷却至室温后,振荡5min,超声5min,10000r/min离心5min,上清液转移至50mL容量瓶中,用水定容至刻度,从中准确移取25mL样液做为待净化液。
1.2 风味发酵乳
称取2g(精确至0.001g)试样于50mL离心管中,加入盐酸溶液(2.0mol/L)40mL,旋紧盖子,摇匀,置于沸水浴中加热30min,取出冷却至室温后,振荡5min,超声5min,加入沉淀剂(183g/L乙酸锌溶液2mL、92g/L亚铁氰化钾溶液2mL)涡旋1min,10000r/min离心5min,上清液转移至50mL容量瓶中,用水定容至刻度,从中准确移取25mL样液于50mL离心管中,10000r/min离心5min使样液澄清作为待净化液
1.3 紫薯吐司
称取2g(精确至0.001g)试样于50mL离心管中,加入盐酸溶液(2.0mol/L)40mL,旋紧盖子,摇匀,置于沸水浴中加热30min,取出冷却至室温后,振荡5min,超声5min,加入沉淀剂(183g/L乙酸锌溶液2mL、92g/L亚铁氰化钾溶液2mL)涡旋1min,10000r/min离心5min,上清液转移至100mL容量瓶中,残渣加入盐酸溶液(2.0mol/L)40mL,常温下,重复提取1次,合并2次提取液,用水定容至刻度,从中准确移取25mL样液于50mL离心管中,10000r/min离心5min使样液澄清作为待净化液。
试样净化(Copure? 胭脂虫红专用柱,150mg,6mL)
活化:使用前依次用6mL甲醇、6mL 2.0mol/L盐酸溶液进行活化,保持柱体湿润;
上样:将待净化液过柱,弃去上样液;
淋洗:用12mL水淋洗,弃去淋洗液,抽干小柱;
洗脱:用6mL磷酸甲醇溶液(2%)进行洗脱,收集洗脱液,于40℃水浴下氮吹浓缩至近干,用磷酸水溶液(0.1%)定容至2mL,涡旋混匀1min,10000r/min离心5min,上清液过0.22μm亲水PTFE滤膜,上机。
色谱柱:Copure C18(4.6 х 150mm,5.0μm)
仪器:液相色谱仪,ThermoFisher U3000
流动相:A:磷酸水溶液(0.1%),B:磷酸乙腈溶液(0.1%)
洗脱方式:洗脱梯度程序见表1
流速:1.2 mL/min,柱温:40 ℃,进样量:20μL
检测波长:494nm
曲线点为5μg/mL的胭脂红酸检测液相色谱图
草莓果酱(本底)中胭脂红酸检测液相色谱图
添加水平为0.02g/kg的草莓果酱中胭脂红酸检测液相色谱图
添加水平为1 g/kg的草莓果酱中胭脂红酸检测液相色谱图
风味发酵乳(畅轻)(本底)中胭脂红酸检测液相色谱图
添加水平为0.006g/kg的风味发酵乳(畅轻)中胭脂红酸检测液相色谱图
添加水平为0.05g/kg的风味发酵乳(畅轻)中胭脂红酸检测液相色谱图
紫薯吐司(本底)中胭脂红酸检测液相色谱图
添加水平为0.02g/kg的紫薯吐司中胭脂红酸检测液相色谱图
添加水平为0.6g/kg的紫薯吐司中胭脂红酸检测液相色谱图
注意事项
1. 因过脱脂棉会损失部分目标物,所以此应用省去了脱脂棉过滤步骤。
2. 处理风味调制乳和紫薯吐司时,提取后的样液较浑浊,所以选择加入了沉淀剂。
3. SPE小柱活化时改成了“依次用6mL甲醇、6mL 2.0mol/L盐酸溶液”进行活化。
4.不同样品的酸碱性有所不同,避免过柱淋洗过程甲醇淋洗造成损失,此应用只用12mL水淋洗SPE小柱。
5.洗脱液建议氮吹至近干,然后用磷酸水溶(0.1%)定容至2mL。
6.尼龙滤膜会对胭脂红酸有吸附,建议过亲水的PTFE滤膜。
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