赫施曼助力焙烤食品中维生素D的测定

维生素D关乎钙吸收与骨骼健康，准确测量可帮助特殊人群合理选择食品，避免缺乏或过量风险。

根据GB 5009.296-2023，测定食品中维生素D含量的方法有三种：

第yi法，正相色谱净化-反相液相色谱法。

原理是试样经氢氧化钾乙醇溶液皂化，液液萃取净化、浓缩后，用正相高效液相色谱仪通过硅胶柱将维生素D与其他杂质分离，将收集的馏分浓缩后，再经反相色谱柱分离维生素D₂与维生素D₃紫外检测器检测，内标法(或外标法)定量。当试样中不含维生素D₂时，可用维生素D₂作内标测定维生素D₃ ；当试样中不含维生素D₃时，可用维生素D₃作内标测定维生素D₂。否则，用外标法测定。

第二法，在线柱切换-反相液相色谱法。

原理是试样经氢氧化钾乙醇溶液皂化，液液萃取或固相萃取净化、浓缩后，一维液相色谱通过C₈柱将维生素D与其他杂质分离后，由柱切换阀转入二维液相色谱中，通过C₁₈柱分离维生素D₂和维生素D₃，紫外检测器检测，内标法(或外标法)定量。当试样中不含维生素D₂时，可用维生素D₂作内标测定维生素D₃；当试样中不含维生素D₃时，可用维生素D₃作内标测定维生素D₂。否则，用外标法测定。

第三法液相色谱-串联质谱法。

原理是试样加入维生素D₂和维生素D₃的同位素内标后，经氢氧化钾乙醇溶液皂化(含淀粉试样先用淀粉酶酶解)，正己烷提取，固相萃取柱净化、浓缩后，通过C₁₈柱将维生素D₂维生素D₃与其他杂质分离，串联质谱检测，内标法定量。

以下简述第一法中标准溶液的配置：

1. 维生素D₂标准储备溶液(1000mg/L)：准确称取50mg(精确至0.1mg)维生素D₂标准品于小烧杯中，用无水乙醇溶解并转移至50mL容量瓶中，定容至刻度，混匀。按附录A进行储备液浓度校正，将该储备溶液装至棕色试剂瓶中，密封后在-18℃下避光保存，保存期6个月。

2. 维生素D₃标准储备溶液(1000mg/L)：准确称取50mg(精确至0.1mg)维生素D₃标准品于小烧杯中，用无水乙醇溶解并转移至50mL容量瓶中，定容至刻度，混匀。按附录A进行储备液浓度校正，将该储备溶液装至棕色试剂瓶中，密封后在-18℃下避光保存，保存期6个月。

3. 维生素D₂标准使用液(10.0mg/L)：用Miragen电动移液器准确吸取维生素D₂标准储备液(1000mg/L)1.00mL于100mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，混匀。在-18℃下避光保存，保存期3个月。

4. 维生素D₃标准使用液(10.0mg/L)：用Miragen电动移液器准确吸取维生素D₃标准储备液(1000mg/L)1.00mL于100mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，混匀。在-18℃下避光保存，保存期3个月。

5. 当用维生素D₃作内标测定维生素D₂时：采用20mL规格的赫施曼opus电子瓶口分配器，设置stepper模式，设置4个分液体积：1.00、2.00、4.00、6.00mL和1个10.00mL，将5个体积的维生素D₂标准使用液(10.0mg/L)分别加入至100mL棕色容量瓶中，再用Miragen电动移液器移取0.50mL维生素D₂标准使用液(10.0mg/L)加入至100mL棕色容量瓶中，再向以6个容量瓶中各加入维生素D₃内标使用液(10.0mg/L)2.50mL，加甲醇稀释至刻度，混匀。此标准系列工作溶液质量浓度分别为50、100、200、400、600、1000μg/L，维生素D₃内标质量浓度为250μg/L。临用前配制。

6. 当用维生素D₂作内标测定维生素D₃时：20mL规格的opus电子瓶口分配器移取维生素D₃标准使用液(10.0mg/L)0.50、1.00、2.00、4.00、6.00mL和10.00mL于100mL棕色容量瓶中，各加入维生素D₂内标使用液(10.0mg/L)2.50mL，加甲醇稀释至刻度，混匀。此标准系列工作溶液质量浓度分别为50、 100、200、400、600、1000μg/L，维生素D₂内标质量浓度为250μg/L。临用前配制。

7. 当用外标法同时测定维生素D₂和D₃时：20mL规格的opus电子瓶口分配器分别吸取维生素D₂标准使用液(10.0mg/L)、维生素D₃标准使用液(10.0mg/L)各0.50、1.00、2.00、4.00、6.00mL和10.00mL于100mL棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀。此标准系列工作溶液质量浓度分别为50、100、200、400、600、1000μg/L。临用前配制。

实验室吸取小体积（几微升到10毫升）的液体，一般采用移液器。Miragen电子移液器，可设定吸液速度，按住吸液，松开即停，数值可在屏幕上实时显示，也可设定最da体积进行吸取。电机控制活塞运动，操作更加稳定和轻松。

还有赫施曼opus电子瓶口分配器，采用触摸屏显示和操作，简便易懂。分辨精度可达微升级别，一次装液可完成相同或不同体积的连续分液，非常适用于毫升级母液的添加与分液。大体积型号更能替代烧杯、玻璃棒、洗瓶等传统工具，实现稀释液的快速、精密添加，尤其适合标准曲线制备以及毫升级试剂的大批量灌装作业。