不少血糖异常的人都有过这样的困扰：明明按时吃药、控制饮食，血糖却像“过山车”一样忽高忽低，想要揪出这些血糖波动的“幕后黑手”，胰岛素与C肽检测堪称“黄金组合”。
胰岛素是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。人胰岛素（Insulin Human）由A、B两个肽链组成，A链有21个氨基酸，B链有30个氨基酸，共51个氨基酸组成。C肽（C-Peptide）又称连接肽，由胰岛β细胞分泌，它与胰岛素有一个共同的前体胰岛素原，胰岛素原裂解成1个分子的胰岛素和1个分子的C肽。胰岛素和C肽如同胰岛β细胞分泌的“孪生兄弟”，二者形影不离却又各有分工，联合检测能从不同维度精准评估胰岛功能，为血糖异常的诊断、治疗和预后判断提供关键依据。
胰岛素测定是诊断糖尿病和区分糖尿病类型的常用方法，也是反映胰岛素细胞贮备和分泌功能的重要指标。C肽在循环中的半衰期是胰岛素的6 - 10倍。因此，C肽通常比胰岛素更丰富，因此更容易准确量化。同时测量内源性胰岛素和C肽有助于区分胰岛素分泌肿瘤与外源性胰岛素注射引起的低血糖，以及1型糖尿病与2型糖尿病。定期检测胰岛素和C肽水平，能动态观察胰岛功能的衰退速度，监测病情进展与预后。
目前临床中应用较广的胰岛素和C肽检测方法主要为免疫法，虽然操作相对简便，但在准确性和特异性上存在一定局限。质谱法凭借其高特异性、高灵敏度的优势，成为“精准检测利器”。而且质谱法可在同一次检测中同时定量胰岛素和C肽等，不仅节省了样本量和检测时间，还能通过联合分析，更全面地评估胰岛功能状态。
本研究采用Waters ACQUITY UPLC I-Class和Xevo TQ-XS IVD液质联用系统开发了一种同时检测血浆样本中C肽和胰岛素的临床研究方法，主要优势如下：
建立了完整C肽和胰岛素的LC-MS/MS分析方法；
固相萃取样本前处理方法简单快速；
液相分析时间快，梯度仅5.5 min;
胰岛素和C肽定量限低至0.2和0.05 ng/mL。
表1. 实验中用到的沃特世耗材信息。
标曲和血浆样品的前处理如下图1所示：
图1. 血浆中C肽和胰岛素固相萃取前处理流程。
1
标准品和实际血浆样品的分离色谱图
C肽和胰岛素标准品用CORTECS C18+色谱柱、
Xevo TQ-XS IVD系统检测的代表性MRM色谱图见图2。图2(A)是目标物浓度皆为0.2 ng/mL标曲点经过前处理后色谱图。图2(B)是正常人血浆样品经过固相萃取后检测得到色谱图，可以看出经过固相萃取后的样本几乎没有干扰，可以进行准确定量分析。
图2. (A) C肽和胰岛素标准品的色谱图（浓度皆为0.2 ng/mL）；(B) 正常人血浆样品经过固相萃取后检测的色谱图（C肽：1.75 ng/mL 胰岛素：0.3 ng/mL）。
2
线性
C肽和胰岛素的线性考察如下图3，分析物浓度和响应值（分析物峰面积/IS峰面积）之间呈线性，且线性相关系数r2>0.995，定量限和线性范围见表2。
图3. C肽和胰岛素在Xevo TQ-XS IVD上的标准曲线，采用1/x2加权线性拟合。
表2. C肽和胰岛素在Xevo TQ-XS上的定量限和线性范围。
本研究采用ACQUITY UPLC I-Class和Xevo TQ-XS系统建立了人血浆样本中C肽和胰岛素完整小分子蛋白的同时定量检测方法。
采用固相萃取的样本前处理操作简单快速，C肽和胰岛素线性范围分别为0.05 - 20 ng/mL和0.2 - 20 ng/mL。
本方法的回收率为92.5% - 111.4%，批内精密度RSD≤6.5%，具有良好的稳定性和准确性。
本方案为临床糖尿病分型及治疗预后的相关研究提供了更加精准、可靠质谱检测方法，为血糖健康保驾护航！
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