人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒实验使用说明书

   人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒实验使用说明书

   BS-0130人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒

   一、实验目的

   本试剂盒采用双抗体夹心法，用于定量检测人血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清液中PDGF的浓度，适用于科研用途，不用于临床诊断。

   二、实验原理

   通过固相抗体包被微孔板捕获样本中的PDGF，加入生物素标记的检测抗体形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物，经洗涤后加入TMB显色底物。显色深浅与样本中PDGF浓度呈正相关，通过酶标仪在450nm波长测定吸光度，结合标准曲线计算含量。

   三、试剂盒组成

   预包被酶标板‌：96孔（8×12条）或48孔（8×6条）

   标准品‌：冻干粉（2000pg/mL），需用标准品稀释液复溶

   生物素化检测抗体‌：100×浓缩液

   酶结合物（SABC）‌：100×浓缩液

   TMB显色液‌：A/B液各6mL（96孔配置）

   终止液‌：6mL（96孔配置）

   20×浓缩洗涤液‌：60mL（96孔配置）

   封板胶纸‌：4张（96孔配置）

   说明书‌：1份

   四、自备试剂与器材

   仪器‌：酶标仪（450nm滤光片）、37℃恒温箱、微量移液器（0.5-1000μL）

   耗材‌：无热原离心管、一次性吸头

   试剂‌：蒸馏水或去离子水

   五、样本处理

   1.血清样本

   室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟。

   收集上清，避免溶血或高血脂样本。短期保存于2-8℃（≤48小时），长期需分装冻存于-20℃（≤1个月）或-80℃（≤3个月），避免反复冻融。

   2.血浆样本

   使用EDTA、柠檬酸钠或肝素抗凝，混合10-20分钟后离心。

   处理同血清样本，注意抗凝剂选择需与检测要求一致。

   3.细胞培养上清

   离心去除细胞碎片，收集上清液。

   若检测细胞内成分，需用PBS（pH7.2-7.4）裂解细胞后离心。

   4.稀释方法（高浓度样本）

   100倍稀释‌：5μL样本+495μL稀释液。

   1000倍稀释‌：两步法（5μL样本→95μL稀释液，混匀后取5μL→245μL稀释液）。

   六、实验步骤

   1.试剂准备

   回温‌：所有试剂及样本于室温平衡30分钟。浓缩洗涤液如有结晶，37℃水浴溶解。

   洗涤液配制‌：20×浓缩液用蒸馏水稀释20倍（如1mL浓缩液+19mL水）。

   标准品梯度稀释‌：

   复溶冻干标准品（2000pg/mL）。

   按2倍稀释法配制梯度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/mL。

   2.加样与孵育

   每孔加入100μL标准品或样本（零孔加稀释液），封板膜覆盖，37℃孵育90分钟。

   洗涤3次（每孔300μL洗涤液，浸泡1分钟/次）。

   每孔加入100μL生物素化抗体工作液（1:100稀释），37℃孵育60分钟。

   洗涤3次。

   每孔加入100μL酶结合物工作液（1:100稀释），37℃孵育30分钟。

   洗涤5次。

   3.显色与终止

   每孔加入90μLTMB显色液，37℃避光反应15-20分钟（显色梯度肉眼可见）。

   每孔加入50μL终止液，溶液变黄。

   4.测定

   酶标仪450nm波长测定吸光度（OD值），以零孔调零。

   绘制标准曲线，计算样本浓度。

   七、注意事项

   安全防护‌：操作血液或体液样本时穿戴实验服及手套，符合生物安全规范。

   试剂保存‌：未使用试剂按说明书温度保存，避免反复冻融浓缩液。

   样本质量‌：避免溶血、脂血或反复冻融，悬浮物需离心去除。

   稀释验证‌：高浓度样本需预实验确定稀释倍数，确保结果在检测范围内。

   仪器校准‌：酶标仪滤光片波长需为450±2nm，使用前预热15分钟。

   八、结果计算

   以标准品浓度为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴），拟合四参数逻辑曲线。样本浓度通过曲线方程计算，若样本稀释需乘以稀释倍数。

   九、有效期与储存

   有效期‌：详见试剂盒标签。

   储存条件‌：2-8℃避光保存，浓缩洗涤液结晶后37℃溶解。

   注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

   人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒实验使用说明书本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴！