HS-D-5800P带您解码Oligo制备纯化

本次应用中为 50 OD 的 20nt Oligo粗品，样品以 1 mL 水溶解后，经 0.22 μm 滤膜过滤。

制备条件采用 Kinetex EVO C18 5 μm 10×150 mm AXIA制备柱，流动相 A 为含 400 mM HFIP 与 16 mM TEA 的水相，流动相 B 为甲醇，流速 4 mL/min，检测波长设置为 260 nm（主检测）与 280 nm（监测），进样量 50 OD。

样品溶解后建议过滤，以降低颗粒污染、异常压力波动和峰形异常风险；HFIP/TEA 类流动相应充分脱气，并尽量减少与空气长期接触；若发现水相吸液端易夹带气泡或基线不稳，可结合系统情况优化吸液方式，并在检测器后端适当增加背压以提高信号稳定性。

在 10 mm 半制备柱、较低流速等条件下，检测器至收集模块之间的延迟体积对应的延迟时间会更明显，但会准确绕让过延迟体积，精准收集目标峰。

由于 Oligo 极性较大、保留相对较弱，建议关注样品溶剂与初始流动相的匹配。必要时可采用三明治进样（稀释进样）以改善峰形和进样重现性。若采用定量环满环进样，应保证总吸样体积充满定量环。例如 5 mL 定量环可采用：流动相 A 3000 μL + 样品 1000 μL + 流动相 A 1000 μL。

在HFIP添加浓度较高、且流动相处于富水或特定配比时，乙腈可能带来相分离/混浊风险，方法开发前应先验证流动相相容性；若体系稳定性不足，优先考虑使用甲醇作为有机相。对存在明显二级结构或分离难度较高的 Oligo 样品，可结合序列特点进一步考察柱温、离子对试剂浓度和梯度斜率，以提升分离度与方法稳定性。

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