核药研发中的 SEC 分析 | 飞诺美色谱柱赋能精准药物开发

抗体-蛋白偶联物的制备与质量控制

偶联效率优化：研究对比了磷酸盐缓冲液（PBS）与三乙醇胺缓冲液（TSMZ）对偶联反应的影响。通过 Phenomenex BioSep-SEC-S3000 色谱柱分析发现（图一），在磷酸盐缓冲盐水（PBS）和 TSMZ 缓冲液溶液中，以 1:2 的抗体与链霉亲和素比例进行偶联反应，使用 TSMZ 时产率要高得多（40% vs. PBS的8%）。以 2:1 的抗体与链霉亲和素比例进行偶联可以减少多聚体生成。

纯化验证：曲妥珠单抗-链霉亲和素偶联产物经凝胶过滤纯化后，与未偶联抗体分别进样 BioSep-SEC-S3000 进行分析。图二显示偶联物的保留时间比未偶联抗体早几分钟，峰形对称且没有较早洗脱的杂质，这表明偶联产物的纯度很高。使用已知分子量的蛋白质标准品对尺寸排阻色谱柱进行校准，发现在 44 -670kDa 范围内，保留时间（RT）与 log₁₀ 分子量的关系呈线性，其方程为 log (MW_t) = (RT - 37.8)/ -4.32。由于该偶联物的洗脱保留时间为 14.6 分钟，计算得出其分子量为 238kDa，这与一分子曲妥珠单抗（185kDa）和一分子链霉亲和素（50kDa）的总分子量 235kDa 非常吻合。SEC 的结果验证了工艺的稳定性。

点击化学介导的放射性标记：从反应优化到体内代谢

条件筛选：监测不同 TCO 投料比（3–15 eq.）对抗体偶联物 Zeta 电荷的影响（电位从 +11.6 mV 降至 +5.1 mV），并通过 Phenomenex BioSep-SEC-S3000 色谱柱分析聚集体含量（图三），找到相对适合的偶联条件。在研究偶联物摩尔比和用量对点击化学介导的放射性标记影响时，提高当量会增加聚集体形成的风险，干扰点击反应的正常进行，进而降低放射化学产率，所以 SEC 的结果能够帮助优化最佳标记条件（表一）。

定点标记抗体的稳定性与成像验证

使用 Phenomenex BioSep-SEC-S3000 分析了纯化后的 ⁸⁹Zr-Df- 硫代曲妥珠单抗偶联物，平均产物纯度超过 93%。同时对偶联物体外血清稳定性进行检测，通过 SEC 结果观察到有高分子量物质缓慢形成，推测这些高分子量物质为聚集体。