【一文解决】氯丙嗪残留测定前处理方法

猪肾和肌肉组织中氯丙嗪残留量测定的前处理方法

氯丙嗪的危害及检测目的 

氯丙嗪属于吩噻嗪类药物，可作用于中qu神经系统，故被作为中qu多巴胺受体的阻断剂，具有镇静、催眠、镇吐、抗晕眩等功效。当前，氯丙嗪常被一些养殖户违规添加至家畜饲料中，目的是通过抑zhi家畜运动来达到“短期育肥”的效果。或在家畜长途运输过程中减少其应激反应，进而降低死亡率。氯丙嗪药物的滥用造成其在动物体内大量残留，并通过食物链进入人体，长期蓄积会引发人体食物中毒、肝脏和肾脏病变等，直接危害人体健康。目前，欧盟明令规定“不得在动物源性食品中检出氯丙嗪”。我国也对氯丙嗪进行了严格的限制，2020年生效实施的GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药zui大残留限量》中规定了氯丙嗪允许作zhi疗使用，但不得在动物性食品中检出。

本文阐述了如何将氯丙嗪从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB/T 20763-2006，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氯丙嗪

——————应用范围：猪肾/肌肉组织——————

液相色谱-串联质谱法

方法原理：氯丙嗪在碱性条件下用特丁基甲醚提取，并通过向提取液中加入磷酸盐缓冲液（pH =3），使氯丙嗪被提取到缓冲溶液中，并用特丁基甲醚净化缓冲溶液，改变缓冲溶液为碱性，将氯丙嗪反提取到特丁基甲醚中，浓缩，定容。供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

前处理仪器：电子天平（感量0.1 mg和0.1 g）；离心机（ZD转速为10000 r/min）；离心管（锥形底玻璃离心管15 mL和10 mL具塞；锥形底聚丙烯离心管50 mL具螺旋盖）；过滤器（聚四氟乙烯膜0.2 μm×13 mm；尼龙膜0.2 μm×47 mm）；液体分配器（1 mL～10 mL和5 mL～50 mL）；微量移吸器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；流动相过滤装置；氮气浓缩仪；高速涡流混合器；振荡器；食物调理机；一次性移液管；酸度计（测量精度为±0.02 unit）；超声波仪；一次性注射器（1 mL）；试样瓶（2.0 mL）。

检测仪器：HPLC-MS/MS+ESI源

试样制备

猪肾要去除脂肪和其他的非肾脏组织，猪肉要去皮和骨头。将其绞碎拌匀。分出0.5 kg作为试样，将制备好的试样密封，并做上标记。将试样置于-18 ℃条件下贮存。

前处理方法

1.提取

称取试样2.00 g（精确到0.01 g）放入50 mL聚丙烯离心管中，加入200 μL乙腈进行涡流混合，混合后加入400 μL 5 mol/L氢氧化钠溶液，并进行涡流混合30 s。在（80±5）℃水浴中放置1 h。在此期间，要对每个测定样品进行两次涡流混合。1 h后，将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入12 mL特丁基甲醚，置于振荡器上高速振荡15 min，离心15 min（转速为4000 r/min）。吸出上清液，定量将特丁基甲醚转移到干净的15 mL玻璃离心管内，待净化。

2.净化

将上述15 mL离心管中加入1 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=3）3 mL，振荡10 min，离心10 min（4000 r/min）。将特丁基甲醚层吸出弃去。在磷酸盐溶液中加入2 mL特丁基甲醚，振荡5 min，离心5 min（4000 r/min），吸出特丁基甲醚层，弃去。然后再在磷酸盐缓冲溶液中加入2 mL特丁基甲醚重复上述步骤。加入1 mL 5 mol/L氢氧化钠溶液摇匀后加入10 mL特丁基甲醚，振荡15 min，离心5 min（4000 r/min）。定量吸取特丁基甲醚转移到干净的10 mL离心管中。在40 ℃条件下用氮吹仪蒸发至干。在浓缩至干的提取物中加入1000 μL流动相溶液，进行涡流混合，超声处理10 min。用0.2 μm×13 mm的聚四氟乙烯注射式过滤器过滤样液，将样液转移到试样瓶中，供液相色谱-串联质谱仪测定。

国标解读

1.氯丙嗪标准物质用无水乙醇配成0.10 mg/mL的标准储备液，在2 ℃～4 ℃避光保存，有效期一年。

2.该国标通过改变提取溶液的pH值使氯丙嗪在特丁基甲醚和缓冲盐溶液之间转移，达到净化的目的。

3.移取特丁基甲醚的过程中，注意离心后轻拿轻放，保证液面分层清晰，准确取出全部有机层溶剂。

4.在氮气浓缩过程中注意控制温度不要超过40 ℃，气流在液面上方0.5 cm处缓缓吹出，随着液面下降调整气针高度，使有机溶剂吹至近干状态。

5.氮气浓缩定容后，先涡旋再超声，保证目标化合物充分溶解下来。

6.如果有条件，建议使用氯丙嗪同位素内标进行回收率的校正。

参考文献

GB/T 20763-2006 猪肾和肌肉组织中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇、咔唑心安残留量的测定 液相色谱―串联质谱法

图1 猪肾和肌肉组织样品中氯丙嗪残留量测定的前处理流程图

氯丙嗪标准物质信息表

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