小鼠转录激活因子4(ATF4)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　小鼠转录激活因子4(ATF4)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　‌小鼠转录激活因子4(ATF4)ELISA试剂盒实验使用说明书主要涵盖实验目的、原理、试剂盒组成及操作步骤等关键信息‌。以下是详细说明：

　　实验目的

　　本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中小鼠转录激活因子4(ATF4)的含量。这有助于研究ATF4在生物体内的表达水平及其与相关疾病或生理状态的关系‌12。

　　实验原理

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠转录激活因子4(ATF4)水平。具体原理为：用纯化的小鼠转录激活因子4(ATF4)抗体包被微孔板，制成固相抗体。往包被单抗的微孔中依次加入转录激活因子4(ATF4)，再与HRP标记的转录激活因子4(ATF4)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过彻底洗涤后加底物TMB显色，TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的转录激活因子4(ATF4)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中小鼠转录激活因子4(ATF4)含量‌1。

　　试剂盒组成

　　试剂盒通常包括以下组件(以48孔或96孔配置为例)：

　　微孔酶标板

　　标准品(含已知浓度的ATF4)

　　样本稀释液

　　检测抗体-HRP(辣根过氧化物酶标记的检测抗体)

　　底物TMB(四甲基联苯胺)

　　洗涤液

　　终止液

　　其他必要配件(如封板膜、吸头等)‌13操作步骤

　　‌准备试剂与样本‌：将试剂盒各组分置于室温平衡，按说明书要求稀释标准品和样本。

　　‌加样‌：在微孔板中分别加入标准品和样本，每个样本设置复孔以提高准确性。

　　‌孵育‌：按说明书要求的时间和温度进行孵育，使抗体与抗原充分结合。

　　‌洗涤‌：使用洗涤液彻底洗涤微孔板，去除未结合的抗体和杂质。

　　‌加入检测抗体‌：向每个孔中加入HRP标记的检测抗体，再次孵育。

　　‌洗涤‌：重复洗涤步骤，去除未结合的检测抗体。

　　‌显色‌：向每个孔中加入底物TMB，避光显色。

　　‌终止反应‌：加入终止液停止显色反应，此时孔内颜色由蓝色变为黄色。

　　‌测定吸光度‌：使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值)。

　　‌计算浓度‌：根据标准品的OD值和已知浓度绘制标准曲线，通过样本的OD值在标准曲线上查找到对应的ATF4浓度‌。

　　请严格按照说明书中的操作步骤进行实验，以确保结果的准确性和可靠性。同时，注意实验过程中的安全防护和废弃物处理。