怎么破?
GraFix密度梯度离心来帮忙
大幅减少聚集与降解颗粒,样本更均一
提升图像信噪比,高质量蛋白颗粒数量可提升数倍
稳定脆弱复合物,让低丰度样品也能上镜解析
兼容质谱、电镜分子量测定、光散射、X射线衍射等多种技术,适用范围广
GraFix实验示意图
一边用梯度离心把蛋白与其他杂质分开,一边用固定剂把蛋白稳定住。分馏后可以直接得到用来做负染电镜或者无染色冷冻电镜的样品。
(c) 传统法:只有10%的图清晰,大部分模糊 (d) GraFix:86%的图都非常清晰,对比度高GraFix信号是传统法的2–5倍。(i)GraFix得到的70S核糖体冷冻电镜结果:蓝色为50S亚基,黄色为30S亚基,绿色为P位点tRNA,(j)与已知的X射线晶体结构完全吻合
密度梯度离心+化学温和固定,让蛋白稳定、均匀、完整。同时,GraFix温和固定不会产生假结构,结构真实可靠,还能帮助提高分辨率。
用GraFix制备的APC/C复合物,结构解析效果明显提升,分辨率从25 ?提高到21 ?
GraFix同样适用结构不稳定、含量低的重要复合物。可让蛋白结构更稳定,可放心进行脱甘油处理。不会在吸附时解体,并可以长时间黏附在电镜网上(几小时),完整颗粒数量暴增10倍以上,完美解决低丰度样品看不见颗粒的问题,是稀有复合物做冷冻电镜的关键技术。
问题来了
如何配置GraFix
使用的线性梯度液和固定液?
使用OptiMATE全自动密度梯度分液系统,即可轻松搞定!只需设置线性梯度液的体积、最低和最高浓度,仪器会通过精密的分液泵系统自动完成铺设。即使是多管铺设,也可保证铺设液体的一致性和准确度。大大提高GraFix实验的一致性和稳定性。
同时,贝克曼库尔特生命科学也提供从梯度液配置到超速离心,样品回收分馏的全套密度梯度离心方案,确保每一次实验的一致性与可重复性:
掌握“密”籍
开启高分辨结构生物学新篇
从样本制备的“老大难”到高清成像的“稳准狠”,GraFix密度梯度离心技术正在帮助越来越多的研究者突破结构解析的瓶颈。无论是核糖体、APC/C这样的大型复合物,还是含量稀少、稳定性差的脆弱蛋白,都能在温和固定与精准分离的双重保障下,展现出最接近天然状态的高清结构。
贝克曼库尔特生命科学
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参考文献
GraFix: sample preparation for singleparticle electron cryomicroscopy.
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