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【超速“密”籍】冷冻电镜制样总翻车?破解蛋白聚集与碎片化的关键秘技

来源:贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司 更新时间:2026-04-01 13:45:30 阅读量:66
导读:【超速“密”籍】冷冻电镜制样总翻车?破解蛋白聚集与碎片化的关键秘技


电镜(包括冷冻电镜)制样过程中,蛋白样品的聚集、不均一、碎片化,都会影响成像的质量和分辨率。常用的样品制备方法(比如色谱、透析、碳膜吸附),或多或少会出现这类问题。


怎么破?

GraFix密度梯度离心来帮忙

  • 大幅减少聚集与降解颗粒,样本更均一

  • 提升图像信噪比,高质量蛋白颗粒数量可提升数倍

  • 稳定脆弱复合物,让低丰度样品也能上镜解析

  • 兼容质谱、电镜分子量测定、光散射、X射线衍射等多种技术,适用范围广


GraFix实验示意图


一边用梯度离心把蛋白与其他杂质分开,一边用固定剂把蛋白稳定住。分馏后可以直接得到用来做负染电镜或者无染色冷冻电镜的样品。


(c) 传统法:只有10%的图清晰,大部分模糊 (d) GraFix:86%的图都非常清晰,对比度高GraFix信号是传统法的2–5倍。(i)GraFix得到的70S核糖体冷冻电镜结果:蓝色为50S亚基,黄色为30S亚基,绿色为P位点tRNA,(j)与已知的X射线晶体结构完全吻合


密度梯度离心+化学温和固定,让蛋白稳定、均匀、完整。同时,GraFix温和固定不会产生假结构,结构真实可靠,还能帮助提高分辨率


用GraFix制备的APC/C复合物,结构解析效果明显提升,分辨率从25 ?提高到21 ?


GraFix同样适用结构不稳定、含量低的重要复合物。可让蛋白结构更稳定,可放心进行脱甘油处理。不会在吸附时解体,并可以长时间黏附在电镜网上(几小时),完整颗粒数量暴增10倍以上,完美解决低丰度样品看不见颗粒的问题,是稀有复合物做冷冻电镜的关键技术。


问题来了

如何配置GraFix

使用的线性梯度液和固定液?


使用OptiMATE全自动密度梯度分液系统,即可轻松搞定!只需设置线性梯度液的体积、最低和最高浓度,仪器会通过精密的分液泵系统自动完成铺设。即使是多管铺设,也可保证铺设液体的一致性和准确度。大大提高GraFix实验的一致性和稳定性


同时,贝克曼库尔特生命科学也提供从梯度液配置到超速离心,样品回收分馏的全套密度梯度离心方案,确保每一次实验的一致性与可重复性:



掌握“密”籍

开启高分辨结构生物学新篇

从样本制备的“老大难”到高清成像的“稳准狠”,GraFix密度梯度离心技术正在帮助越来越多的研究者突破结构解析的瓶颈。无论是核糖体、APC/C这样的大型复合物,还是含量稀少、稳定性差的脆弱蛋白,都能在温和固定与精准分离的双重保障下,展现出最接近天然状态的高清结构。


贝克曼库尔特生命科学

助力您的每一次结构发现


OptiMATE全自动梯度制备分液系统

  • 动化、可重复的梯度制备

  • 线性梯度离心运行时间缩短75%

  • 仅需几小时即可培训新用户

  • 适用于AAV、EV、LNP等多种样品



Optima X系列超速离心机(现已国产)

  • 78年历史超离技术积累,独家设计技术领先

  • 配备先进软件与多重安全保护

  • 多种转子与离心管可选,满足各类需求

  • 国产无需进口论证,缩短采购周期,供应链更稳妥



OptiXTRACT样品回收辅助工具

  • 导式针头穿刺,安全提取条带

  • 一次最多可同时抽取5个条带

  • 实现精准、可重复的样品回收



参考文献

GraFix: sample preparation for singleparticle electron cryomicroscopy.

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贝克曼库尔特公司对颗粒特性的研究始于上世纪的四十年代。从发明电子感应区技术(库尔特原理)用于分析颗粒大小和数目开始至今半个多世纪以来,贝克曼库尔特公司一直专注于颗粒分析的研究开发与应用。其颗粒特性分析仪器已经成为当今具竞争力和独当一面的表征颗粒特性的产品!无论是对粒度的分析,还是颗粒的计数;无论是在微米-亚微米范围的测量,还是在纳米尺度内的测量;既拥有应用库尔特原理的产品,同时也拥有应用激光衍射散射原理以及动态光散射原理的产品,使贝克曼库尔特公司成为粒度分析同业的翘楚!贝克曼库尔特的产品已成为“高准确性”、“高分辨率”的代名词,在用户中享有盛誉。在粒度分析行业发展中一直发挥着深远

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