透射电镜制样

　　透射电镜全称透射电子显微镜，是一种高分辨率、高放大倍数的显微镜，是材料科学研究的重要手段，能提供极微细材料的组织结构、晶体结构和化学成分等方面的信息。

透射电镜制样流程

　　组织取材(60s内)，体积<1mm³，之后进行如下步骤：

　　1、前固定：3%戊二醛2h或过夜。

　　2、漂洗：磷酸缓冲液，3次，10min/次。

　　3、后固定：1%锇酸固定液，2h。

　　4、漂洗：磷酸缓冲液，3次，10min/次。

　　5、梯度脱水：50%丙酮，70%丙酮，80%丙酮，90%丙酮两次，各10min。1**%丙酮两次，各15min。

　　6、渗透：丙酮/包埋剂(1：1、1：2)，室温各1h。丙酮/包埋剂1：3，4度过夜。纯包埋剂，4度过夜。

　　7、包埋：纯包埋剂(37度、45度、60度各24h)。取出包埋块，进行超薄切片，片厚70nm。分别采用醋酸双氧铀对切片进行染色30min，双蒸水漂洗3-5次，之后用柠檬酸铅染色10min，双蒸水漂洗3-5次。待切片干燥后，透射电镜观察。

透射电镜样品更换方法

　　一、样品杆插入步骤：

　　1、更换前一定要观察银屏diyi页，检查样品杆位置是否在ZX位置;

　　2、确认灯丝处于关闭状态!

　　3、使用样品杆上的引导钉(guide pin)对齐样品插口，然后插入到样品杆停下后(此时不可松手!)，等待响声直至样品杆被吸住，再将“PUMP/AIR”开关打至“PUMP”一侧，松手静候(一般超过10min)。

　　4、等角度计(goniometer)的绿灯亮后，屏幕P3页显示P4值接近30，顺时针轻转插入一段后，等待V2和V5B均打开后再顺时针轻转继续插入直到终止，注意整个过程吸力很大，一定要拉紧样品杆，使之慢慢进入。

　　5、插入完毕后一定要等goniometer的绿灯亮，检查P3页的P4值，P4值应该≤30，阀2打开，右侧下方SIP真空在10^-5级，并指针指向中间方可打开灯丝进行观察。

　　6、整个插入样品杆的过程中，切勿大幅度摇动样品杆，整个过程要轻、缓慢地进行;人体的任何地方都不可接触样品杆O环到样品杆顶端位置。

　　二、样品杆拔出步骤：

　　1、关闭透射电镜灯丝电流;

　　2、用观察窗左侧“SPEC CONTROLLER”控制面板上的N键复原样品杆位置到原点附近(注意在没有插入样品杆时，严禁使用“N”键!)或用控制球复原;确认样品位置“specimen position”为原点：=0，0，0，tilt X，y=0;

　　3、将Goniometer的“pump/Air”打倒“Air”一侧;

　　4、轻轻将透射电镜样品杆往外拉，拉一段后，会感觉到拉不动，此时稍稍停顿后逆时针轻轻转动一小角度后，再往外拉，很短的距离后，会又拉不动，此时再逆时针轻轻转动一小角度，停顿一会会听到两声阀门启动的声音，然后会感觉到样品杆没有吸引力了，再轻轻拔出样品杆;

　　5、整个过程中，拉动样品杆要沿着goniometer的轴拉动，不能大幅度摇晃，而且手要一直握住样品杆。整个过程要轻、缓慢地进行;人体的任何地方都不可接触样品杆O环到样品杆顶端位置。

　　三、样品在样品杆上更换步骤：

　　1、要把透射电镜样品杆放在样品杆架上;

　　2、用专门工具一手将样品铜网支撑金属片固定夹抬起，另一手用大捏子夹住铜网支撑金属片，把金属片放到旁边支架，螺丝孔对准支架上的螺丝;

　　3、用专用螺丝批轻轻拧松2个固定螺丝(不要拧下来，只要拧松即可);

　　4、轻轻移开固定铜网的弹片(小心损坏铜网);

　　5、用专用捏子轻轻取出铜网，放上新铜网;

　　6、重新将固定铜网弹片盖上铜网(注意观察位置，如不对，则要进行调整);

　　7、用拧紧螺丝固定弹片，一手用专用工具抬起样品架上的固定夹，一手用大捏子将金属片放到固定夹正确位置上，放下固定夹。