透射电镜操作方法

　　透射电镜，全称透射电子显微镜，是用于观察组织细胞超微结构的大型精密电子仪器，已广泛应用于医学、生物学等各个研究领域，成为研究细胞生物学、组织学、病理学、解剖学以及临床病理诊断的重要工具之一。

　　一、开机程序

　　1、首先打开房间空调，冷却循环水房温度21度，操作室25度;

　　2、开启冷却水循环装置，一个独立的小的控制器，先将开关打至ON，再将按下POWER键;

　　3、启动稳压电源，稳定于220V，查看电压箱供电指示灯亮;

　　4、用钥匙启动主机，从OFF档位旋到START位，松开后钥匙自动回到ON位置。透射电镜自动抽真空，等待约40分钟。

　　5、直至DP绿灯亮，HIGH绿灯亮，READY绿灯亮(若不亮的话，将LENS LIGHT打至ON档位)。

　　二、电子枪合轴

　　1、确认READY绿灯亮;

　　2、把样品拨出，物镜光栏拨出至0档位;

　　3、加高压：按下HT键后，依次按下40-60-80-100KV键，并注意观察束流表是否正常，每次都要等电流表显示稳定之后再进行下一步，一般调到80KV就行了。

　　4、加灯丝：将FILAMENT EMIISSION旋钮缓慢旋至锁定位置。

　　5、一般在SCAN(5300倍)条件下调节，调节CONDENSER钮，得到光斑。

　　6、SPOT SIZE调到3档，调节CONDENSER钮聚光，得到Z小Z亮光斑，然后用左右ALIGNMENT：TRANS(小的)将光斑拉至ZZX位置(ZX位置有一黑点)。

　　7、SPOT SIZE调到1档，调节CONDENSER钮聚光，得到Z小Z亮光斑，然后用GUN ALIGNMENT：TRANS(X、Y)将光斑拉至ZX位置。

　　8、再重复6、7步骤，使束流不偏离ZX。

　　三、调灯丝相

　　1、透射电镜在SCAN模式下，SPOT SIZE调到1档。

　　2、将FILAMENT EMIISSION旋钮稍稍往回调，到看到灯丝欠饱和像，即车轮像(鱼眼像)，若车轮像不对称，则进行下面调节。

　　3、缓慢旋转GUN ALIGNMENT：TILT(X、Y)，使灯丝像对称。

　　4、然后调节FILAMENT EMIISSION旋钮至灯丝饱和(即刚好全亮，没有阴影)，并锁定该位置。

　　四、粗对焦

　　1、透射电镜关灯丝(FILAMENT EMIISSION旋钮至OFF)后，插入样品，插入物镜光栏;

　　2、透射电镜开灯丝(FILAMENT EMIISSION旋钮至ON)后，放大光斑至满屏(以免烧坏铜网);

　　3、找到样品，并选中一目标为参照。

　　4、将IMAGE WOBBLER打至ON，此时看到样品会有一定的晃动，调节FOCUS旋钮(有大中小三个，一般只用到中和小)至透射电镜图像清晰没有重影。

　　五、聚光镜对中调节

　　1、透射电镜关灯丝后，拨出样品，拨出光栏，开灯丝，缩小光斑，检查是否在ZX位置。

　　2、在SCAN模式，SPOT SIZE 1档情况下，将COND ALIGNMENT打到ON，然后下面一WOBBLER键打到X，以调节光斑重合，同样的方法进行Y轴对中调节，调节完毕之后打到中间OFF档。

　　3、将IMAGE WOBBLER键打到ON，调节IMAGE WOBBLER旋钮至重合。

　　六、电流ZX调节

　　1、透射电镜插入样品，插入光栏，找到一样品做为参照物，调节时放大倍数小于5万倍。

　　2、用目镜观察，聚焦，找准参照物，用FOCUS调焦至Z清晰。

　　3、快速反复转动FOCUS旋钮(以Z清晰位置为ZX前后旋转)，此时观察参照物样品的情况，如有放大缩小的情况(看到样品是以某点为ZX在旋转)那就是正常的，若是样品有左右或者上下移动的现象，就需要调节ALIGNMENT的大旋钮，TILT钮直至正常。

　　七、电压ZX调节

　　1、在第六步的基础上，放大倍数(大于5万倍)。

　　2、找到一参照物，调焦至Z清晰。

　　3、HVWOBBLER置于ON，若参照物不偏离ZX而四周同心振动，则电压ZX良好，反之，若参照物有漂移，则用左右ALIGNMENT：TILT调节。

　　八、光栏的调节

　　1、聚光镜光栏调节：判断透射电镜光栏是否在中间位置，调节CONDENSER时，光斑不在中间，放大时会有很大阴影(电子束被东西挡住)，移动样品时也没有改变，此时可以断定是光栏位置不正确，通过调节光栏上两个旋钮，使光栏回到ZX位置。

　　2、物镜光栏调节：打开FUNCTION：SADIFF(控制台D区，与SCAN一排的一个按钮)，调节SA/HD DIFFRACTION：CAMERA LENGTH(控制台B区)和物镜光栏上的两个旋钮，使得中间Z亮点周围的一圈较暗的光斑变得对称即可。

　　九、聚光镜像散调节

　　透射电镜在没有放入样品的情况下：插入聚光镜光栏(2档)，SPOT SIZE调至3档，调节CONDENSER钮至光斑Z小Z亮，再调节COND STIGMATORX、Y旋钮，使得光斑变得Z圆，即完成聚光镜像散调节。

　　十、物镜像散调节

　　1、在完成以上调节，即确认透射电镜对中状态良好，电压ZX对中，无聚光镜像散，光栏位置正确的情况下进行物镜像散调节。

　　2、插入物镜光栏，在观察样品的时候调节，在高倍下(大于10万倍)找到一样品作为参照，改变焦距，观察样品边沿系统是否均匀，若有像散，则进行以下操作。

　　3、配合调节OBJ STIGMATOR：X、Y旋钮(控制台E区)和FOCUS旋钮，消除像散。

　　十一、样品装卸操作

　　1、确认样品装卸时透射电镜状态：放大倍数调至较小倍数，灯丝发射至OFF。

　　2、右边的旋转手柄有四个档位：空档位、SET、AIRLOCK、ENG，观察样品的时候一定在SET档位，ENG档位用来换样品，当需要打开左边的样品室时，一定要放置在AIRLOCK档位，空档位只是做一个过渡。

　　3、左边的样品室旋转手柄上有两种标识，一种是数字(1-6)，另外间于数字中间的是一些点，当数字对正时，可以用右边的旋转手柄把相应的样品从样品室中取出。当需要打开样品室换下一批样品时，要保证所有的样品都留在样品室，这样就要让数字中间的点对正，再将右边的旋转手柄拉出。

　　4、当右边旋转手柄置于AIRLOCK档位时可以打开样品室，左边有一能上下扳动的把手。

　　十二、关机程序

　　1、放大倍数降至小于1万倍，光斑满屏。

　　2、退灯丝至OFF。

　　3、退高压，可直接按下20KV按扭，再按高压键HT(灯灭)。

　　4、钥匙旋至OFF，等待约15分钟，透射电镜面板上所有的灯都熄灭，机械泵停止工作，关冷却水装置，关稳压电源，关电源开关。