巨噬细胞清除小课堂 | 第四课：肠道

肠道巨噬细胞通过履行一系列独特且看似不协调的多样化职责，积极地维持胃肠道的动态平衡。例如，肌肉巨噬细胞能够通过支持肠道神经元来促进胃肠蠕动，黏膜巨噬细胞则肩负着支持口服食物抗原耐受性以及清除突破上皮屏障的病原体的双重任务。亚上皮巨噬细胞位于上皮单层细胞的正下方，是抵抗入侵病原体的第一道防线，它们具有高吞噬性和强杀菌性，在维持组织稳态、清除病原体和调节免疫反应中发挥重要作用。血管相关巨噬细胞，不仅在粘膜部门的水平上保护免受入侵微生物的侵害，而且还需要防止病原体分布到体循环中。由此可见，功能各异的巨噬细胞群体分布于不同的解剖微环境中，包括上皮层、血管丛、肠腺、次级淋巴器官、外肌层以及肠道神经系统等。

前面介绍了用巨噬细胞清除剂（Clodronate Liposomes）在清除肺部巨噬细胞的应用情况，今天我们来分享下使用巨噬细胞清除剂（Clodronate Liposomes）清除小鼠肠道巨噬细胞的相关文章及方法。

通过流式细胞术确认巨噬细胞的耗竭，结果显示超过80%的F4/80阳性巨噬细胞被耗竭。

文章来源：Macrophage depletion using clodronate liposomes decreases tumorigenesis and alters gut microbiota in the AOM/DSS mouse model of colon cancer

巨噬细胞清除方法：在8-10周龄时，所有小鼠腹膜内注射单剂量10 mg/kg 偶氮甲烷（AOM），指定为第0周。将DSS（生化;36,000–50,000 mw）溶解在过滤后的饮用水中，并在以下几周内对小鼠施用 7 天：第1周（2% DSS）、第4周（1% DSS）和第7周（1% DSS）。为了消耗巨噬细胞，我们从第 6.5 周开始每周两次腹腔注射200 μL（～1 mg） Clodronate Liposomes，直至安乐死。

结果分享：

通过细胞因子和巨噬细胞标志物的定量PCR对结肠和结肠息肉组织的基因表达谱如图所示。在氯膦酸盐处理组中，结肠和结肠肿瘤组织中巨噬细胞标志物F4/80均显著降低（P <0.001和P = 0.024），证实氯膦酸盐可有效消耗靶组织和肿瘤中的F4/80阳性细胞（图A）。这与氯膦酸盐处理的小鼠结肠组织中MCP-1的减少一致，MCP-1是一种强巨噬细胞化学引诱剂（P = 0.019，图B）。

文章来源：Depletion of muscularis macrophages ameliorates inflammation-driven dysmotility in murine colitis model

巨噬细胞清除方法：雄性FVB/Ant小鼠（100-120日龄）用含有3%葡聚糖硫酸钠（DSS）的饮用水处理7 天，构建结肠炎模型小鼠。对于氯膦酸盐处理，接受DSS处理的小鼠和对照动物同时在实验方案的第四天通过尾静脉注射200 μL的Clodronate Liposomes。 

结果分享：

文章来源：Targeting colonic macrophages improves glycemic control in high-fat diet-induced obesity

巨噬细胞清除方法：为了特异性耗竭结肠巨噬细胞，将Clodronate Liposomes体通过涂有润滑剂的柔性灌胃针在麻醉小鼠体内进行直肠内注射。

结果分享：

野生型小鼠被喂食以椰子为基础的高脂饮食（HFD）1周，并通过直肠内注射氯膦酸盐（蓝绿色三角形）或PBS脂质体（粉红色圆圈）进行处理：a.腹腔内葡萄糖耐量测试 (IPGTT)，IPGTT时的体重（PBS n =15，氯膦酸盐n = 18），胰岛素（PBS n = 9，氯膦酸盐n = 11），以及胰岛素耐量测试 (ITT)（PBS n = 9，氯膦酸盐n = 5）。b.离体环境下胰岛的基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌。c.近端结肠中的结肠巨噬细胞(c-Macs)倍数变化。

此外，不同组织中驻留的巨噬细胞有不同的给药方法。我们将继续整理相关文献，为大家提供更多参考。如果您有任何特定的组织部位或巨噬细胞清除方法的需求，请在留言区告诉我们，我们会优先整理相关内容。