顶流多兽残检测方案！适用于GB 31658.17-2021

GB 31658.17-2021 标准介绍

      动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物多残留量的测定UPLC-MS/MS法

　　2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比，在畜禽肉及副产品项下多个产品种类中新增了检测方法：《GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱－串联质谱法》，该方法可同时检测三大类兽药残留。

　　迪马科技参考此标准，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定的方法，利用Mcllvaine缓冲液(pH 5.0)和磷酸盐缓冲液提取，ProElut PLS净化，Leapsil C18色谱柱分离检测；定量限与标准方法一致，为10.0μg/kg；回收率在60%-110%之间。方法实验过程基本参考标准，部分进行优化。对比国标方法，本方案具有回收率高、方法稳定性好等优点。

GB 31658.17-2021 标准介绍

动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物多残留量的测定UPLC-MS/MS法

1、适用范围

本方案适用于牛、羊、猪、和鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留的检测。方法定量限是10.0μg/kg。

2、标准品配制

(1)单标储备液：分别称取适量四环素、土霉素、金霉素、多西环素、噁喹酸、氟甲喹、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、麻保沙星、沙拉沙星、二氟沙星，用甲醇配制成1.0mg/mL的单标储备液；

(2)16种磺胺混标储备液100.0μg/mL：包含乙酰磺胺、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺间二甲基嘧啶，每个目标物浓度都是100μg/mL；

(3)13种喹诺酮混标储备液：分别称取适量喹诺酮单标储备液用甲醇定容到10mL,得到50.0μg/mL的喹诺酮混标储备溶液；

(4)4种四环素类混标储备液：分别称取适量四环素类单标单标储备液用甲醇定容到10mL,得到100.0μg/mL的四环素类混标储备溶液；

(5)33种兽药混标储备液1.0μg/mL：分别取(2)(3)(4)步骤的混标储备液适量，用乙腈配制成1.0μg/mL；

(6)33种兽药混标中间液0.1μg/mL：取适量(5)33种混标储备液，用乙腈配制成0.1μg/mL。

3、提取

(1)称取样品1.0g于50mL离心管中，加Mcllvaine-NaEDTA缓冲液*(pH 5) 8mL，涡旋5min，  6000rpm离心2min，收集上清液；

(2)残渣中加磷酸盐缓冲液* 8mL，重复提取一次，合并提取液，混匀，备用。

*Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)10.9g、柠檬酸(C6H8O7·H2O)12.9g、乙二胺四乙酸二钠盐39.2g，加水900mL，用1mol/L的氢氧化钠溶液调pH至5±0.2，用水稀释至1000mL。

*磷酸盐缓冲液：取0.05mol/L 磷酸二氢钠溶液 190mL，用0.05mol/L 磷酸氢二钠溶液稀释至1000mL。

4、净化

ProElut PLS 200mg/6mL(Cat.#: 68012)

(1)活化：依次加入5mL甲醇、5mL水，弃去流出液；

(2)上样：加入待净化液5mL，弃去流出液；

(3)淋洗：依次用5mL水、5mL 5%甲醇水溶液淋洗，弃去流出液；

(4)洗脱：向柱中加入2.5mL甲醇，然后再加入2.5mL 2%氨水甲醇，收集流出液；

(5)重新溶解：将洗脱液在55℃下氮吹至0.5mL，加入0.5%甲酸水，并定容至1mL，过0.22µm Nylon 滤膜(Cat.#: 37177)，上机分析。

*注：同方法制备基质匹配标准溶液。

5、分析条件

UPLC 条件

色谱柱：Leapsil C18 100x2.1mm, 2.7μm (Cat.#：86005)

流速：0.3mL/min

进样量：5μL

柱温：40℃

流动相：A:0.5%甲酸水溶液 B:0.1%甲酸乙腈

梯度设置:

质谱条件：

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

6、添加回收结果

7、相关产品信息

附录一

19种磺胺类混标(GB 31658.17-2021 | 2022国抽兽残)

附录二

13种喹诺酮混标(GB 31658.17-2021 | 2022国抽兽残)