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鱼骨泥酶解工艺优化及酶解液呈味特性研究---德国AIRSENSE电子鼻
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本文由 北京盈盛恒泰科技有限责任公司 整理汇编
2022-08-22 11:05 289阅读次数
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摘要:以鳕鱼骨制备的超微细鱼骨泥为对象,研究鱼骨泥酶解的Z佳工艺条件,以水解度为指标,在单因素的基础上,利用响应面优化酶解工艺,并根据电子鼻、电子舌、气相离子迁移色谱(GC-IMS)、游离氨基酸检测结果,分析酶解对鱼骨泥呈味特性的影响。结果表明,鱼骨泥Z佳酶解工艺为:选用风味蛋白酶,酶解时间5 h,加酶量1.0%,料液比1:1,在此条件下水解度可达43.8%。电子鼻分析结果显示,酶解液中芳香物质增多,烷烃、氨类等具有不良风味的化合物含量降低;电子舌分析结果显示,酶解液酸味提升,苦味减少,整体呈味特性良好、滋味丰富。鱼骨泥和酶解液中共检测出29种风味物质,其中鱼骨泥中主要挥发性风味物质是醛类和酮类,酶解液中主要呈味物质是酮类和酯类,挥发性风味物质的种类及含量差异显著。酶解增加了呈味氨基酸的含量,赋予了酶解液良好的风味。 关键词:鱼骨泥;酶解;风味;呈味化合物;
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鱼骨泥酶解工艺优化及酶解液呈味特性研究---德国AIRSENSE电子鼻
- 摘要:以鳕鱼骨制备的超微细鱼骨泥为对象,研究鱼骨泥酶解的Z佳工艺条件,以水解度为指标,在单因素的基础上,利用响应面优化酶解工艺,并根据电子鼻、电子舌、气相离子迁移色谱(GC-IMS)、游离氨基酸检测结果,分析酶解对鱼骨泥呈味特性的影响。结果表明,鱼骨泥Z佳酶解工艺为:选用风味蛋白酶,酶解时间5 h,加酶量1.0%,料液比1:1,在此条件下水解度可达43.8%。电子鼻分析结果显示,酶解液中芳香物质增多,烷烃、氨类等具有不良风味的化合物含量降低;电子舌分析结果显示,酶解液酸味提升,苦味减少,整体呈味特性良好、滋味丰富。鱼骨泥和酶解液中共检测出29种风味物质,其中鱼骨泥中主要挥发性风味物质是醛类和酮类,酶解液中主要呈味物质是酮类和酯类,挥发性风味物质的种类及含量差异显著。酶解增加了呈味氨基酸的含量,赋予了酶解液良好的风味。 关键词:鱼骨泥;酶解;风味;呈味化合物;[详细]
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2022-08-22 11:05
期刊论文
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白贝肉酶解工艺的优化及其产物呈味特性研究---日本INSENT电子舌
- 摘要:通过酶解法利用白贝制备酶解产物,并对其进行滋味评价,为白贝调味品的开发奠定了前期基础。以水解度为指标,筛选蛋白酶后,应用响应面优化得到Z佳酶解工艺,制备白贝酶解产物,测定其游离氨基酸、核苷酸、有机酸和有机碱含量,并通过滋味活性值评价这些呈味物质对提取物滋味的贡献。采用复合蛋白酶进行工艺优化,Z佳酶解工艺为加酶量4 586 U/g、料液比1∶4.4、酶解温度58℃、酶解5 h,此条件下水解度达42.46%。所制备的酶解液中鲜味和甜味氨基酸含量占游离氨基酸总量的44.70%,鲜味核苷酸GMP和IMP的含量分别为24.21 mg/100 g和66.39 mg/100 g,有机酸琥珀酸含量为360.33 mg/100 g,有机碱甜菜碱含量为394.00 mg/100 g。电子舌分析表明,酶解产物中鲜味、甜味、苦味特征明显。白贝酶解产物中滋味成分丰富,鲜味含量较高,可用于调味品的开发。
关键词:白贝;酶解;响应面优化;呈味特性;[详细]
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2023-12-11 12:23
期刊论文
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茶多酚对牡蛎酶解液的风味改善作用---德国AIRSENSE电子鼻
- 摘要:为研究茶多酚对牡蛎酶解液风味的影响,在探讨酶解时间、茶多酚处理方式和添加剂量对牡蛎酶解液水解度和感官评分的影响基础上,借助电子鼻和GC-MS对茶多酚处理前后牡蛎肉酶解液中的挥发性风味物质进行比较鉴定。结果表明:酶解会引起牡蛎风味变差;酶解前添加茶多酚可显著改善牡蛎酶解液的风味,且不会影响氨基态氮的释放,Z佳添加剂量为0.4%;从牡蛎酶解液及茶多酚预处理牡蛎酶解液中分别鉴定出31和23种挥发性化合物,共同被检测出的成分有13种;关键性风味化合物分别为8种和5种,同时分别有6种和4种挥发性化合物对两组酶解液的风味起重要的修饰作用。结合感官数据和电子鼻分析结果,研究发现酶解前添加0.4%茶多酚不会显著影响氨基态氮的释放,可通过改变挥发性成分的组成及含量,有效减弱酶解液的腥臭味,提升果香味,从而达到改善牡蛎酶解液风味的效果。
关键词:牡蛎酶解液;风味;茶多酚;气相色谱-质谱法;[详细]
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2024-09-14 17:18
期刊论文
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基于深度酶解花生蛋白制备增咸酶解液的工艺优化-日本INSENT电子舌
- 摘要:目的 基于深度酶解花生蛋白制备增咸酶解液,并探究其最佳制备工艺。方法 采用复合酶分步酶解法制备花生蛋白增咸酶解液,以单因素实验和响应面法确定最佳酶解条件,并通过对酶解产物的相对分子量分布、氨基酸含量、游离氨基酸含量和电子舌结果进行分析,解析酶解产物的增咸特性。结果 花生蛋白增咸酶解液的最佳工艺参数为:花生蛋白混合料液(料液比1:10, g:mL), 95°C下热处理20 min,调节pH 6.5,木瓜蛋白酶加酶量:3020 U/g底物, 55°C酶解2.8 h,风味蛋白酶加酶量:610 U/g底物, 55°C继续酶解3.8 h。在此条件下花生蛋白水解度高达16.65%。经感官评价和电子舌分析结果表明:当0.5%(m/m)的花生蛋白酶解物加入到0.5%(m/m) NaCl溶液时,咸味增强率可达76.21%。结论 经深度酶解作用后,酶解产物分子量均在3000 Da以下,同时鲜味氨基酸占比较高,赋予酶解产物增咸的呈味特性,此研究为花生蛋白在减盐食品的应用提供了理论依据。
关键词:减盐;花生蛋白;深度酶解;工艺优化;电子舌;[详细]
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2024-09-27 07:30
期刊论文
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蓝蛤酶解液美拉德反应工艺优化及其对挥发性风味物质的影响---德国AIRSENSE电子鼻
- 摘要:以蓝蛤超高压酶解液为原料,研究了温度、时间以及pH对美拉德反应产物的影响,并对美拉德反应条件进行优化,探究了反应前后挥发性风味物质的变化。结果表明,反应温度对美拉德反应的影响Z大,并且电子鼻具有良好的区分效果;Z佳反应条件为:反应温度120℃、时间90 min、初始pH 7.0。此外,通过HS-SPME-GC-MS法测定美拉德反应前后酶解液的气味发生变化,具有腥味特征的醛类明显降低,而具有肉香味的呋喃和含硫化合物含量增加。结论:蓝蛤超高压酶解液经过美拉德反应可以明显改善其风味。 关键词:蓝蛤;酶解;美拉德反应;挥发性风味物质;[详细]
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2022-10-17 12:11
期刊论文
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速溶龙眼粉酶解提取物的喷雾干燥工艺优化
- 龙眼富含有多种生物活性物质等可溶性固形物的特点,采用有效的提取分离和干燥技术是制备龙眼粉的关键。酶法提取植物活性物质,具有提取速度快、条件温和和效率环保等优点。喷雾干燥可快速蒸发暴露在高温环境中的小雾滴水分,由于其良好的质量控制和连续化生产等特性,被广泛用来生产粉状产品。
[详细]
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2022-05-18 10:26
其它
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酶解小麦面筋蛋白_卡拉胶复合物凝胶特性研究
- 酶解小麦面筋蛋白_卡拉胶复合物凝胶特性研究[详细]
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2024-09-28 22:00
其它
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基于电子鼻和TAV对菌骨酶解液美拉德反应前后风味差异分析---德国AIRSENSE电子鼻
- 摘要:为制备风味良好的菌骨酶解调味基料,以虎掌菌和鸡骨为原材料,在单因素试验的基础上进行正交试验设计,优化菌骨酶解液美拉德反应工艺;然后结合味觉活性值(taste activity value, TAV)、主成分分析(principal component analysis, PCA)和线性判别分析(linear discriminant analysis, LDA)对反应前后酶解液的游离氨基酸和电子鼻结果进行风味差异评估。结果表明,Z佳工艺条件为pH 4.5、温度110℃、酶解液比例1∶1、时间90 min、还原糖添加量3%、硫胺素添加量3%、L-半胱氨酸盐酸盐添加量2%,验证得到的反应液感官评分为(12.5±2.3)分,褐变程度OD值为0.132±0.041。美拉德反应后,甜味和苦味氨基酸含量增加,鲜味氨基酸含量减少,其中反应前后样品中共有13个游离氨基酸的TAV>1,对滋味贡献Z大的均为谷氨酸,TAV分别为112.35和41.96。电子鼻结果表明,美拉德反应前后样品均对W1W、W2S和W5S传感器敏感,表明两者风味物质主要是硫化物、氮氧化合物和醇类等挥发性物质,但是美拉德反应后风[详细]
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2023-03-06 11:09
期刊论文
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植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶联试剂盒分析
- 植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶联试剂盒分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围:0.8U/L-20U/L使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)水平。用纯化的植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入苯丙氨酸解氨酶(PAL),再与HRP标记的植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的苯丙氨酸解氨酶(PAL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(40IU/L)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶联试剂盒分析操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。20U/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液10U/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液5U/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液2.5U/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液1.25U/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶联试剂盒分析一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月[详细]
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2018-11-04 10:00
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乳酸菌混合发酵毛酸浆果汁工艺优化及发酵特性分析---德国AIRSENSE电子鼻
- 摘要:以毛酸浆果汁为原料,采用植物乳杆菌和副干酪乳杆菌混合发酵果汁,分析发酵前后的毛酸浆果汁理化指标、黄酮、多酚含量和挥发性气味成分变化情况。结果表明:植物乳杆菌和副干酪乳杆菌接种比例2∶1(V∶V),接种量1.0%(V∶V),发酵时间12 h时,毛酸浆发酵果汁感官评分、总黄酮和多酚含量构成的综合评分Z佳。毛酸浆果汁中主要的气味成分为萜烯类物质和无机硫化合物,混合乳酸菌发酵可以明显提高果汁中萜烯类物质、无机硫化物、氮氧化合物、有机硫化物和芳香物质含量,特别是对健康有益的萜烯类物质。本研究对乳酸菌发酵毛酸浆果汁的工业化生产具有重要的指导意义。 关键词:毛酸浆;乳酸菌发酵;工艺优化;发酵特性;气味;[详细]
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2022-11-07 13:25
期刊论文
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电子鼻初始pH值对鸡骨素酶解液Maillard反应产物的影响
- 摘要:以鸡骨素酶解液为原料,研究了不同初始pH值条件下,添加木糖、半胱氨酸及硫胺素制备的Maillard反应产物(MRPs,maillardreactionproducts)在热反应过程中的特性变化。研究表明,pH值差异引起各体系氨基酸和总糖初始含量及变化趋势差异,pH值5、7和9体系反应终点多肽含量分别为100.11、100.01、104.55mgmL-1;与其它2个体系相比,pH值9体系分子量为2.3、1.39kDa的峰消失,出现峰面积较大的2.95kDa峰和较小的1.04kDa峰,褐变程度为pH值7体系的1.7倍;随着pH值升高,不同体系的MRPs风味主成分存在一定差异,pH值7体系的有机硫化物电子鼻响应值约为其它两个体系的1.6倍,pH值9体系的氮氧化物响应值Zda。不同初始pH值影响添加物的含量及状态,导致各体系Maillard反应历程不同,引起MRPs化学组分的差异。本研究为鸡骨素酶解液MRPs风味及功能组分生成机制的研究及鸡骨高值化衍生产品的开发提供一定理论参考。[详细]
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2018-08-16 10:00
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鳕鱼骨低苦味多肽酶解制备及其特性研究---日本INSENT电子舌
- 摘要:本研究以鳕鱼骨为原料,通过控制水解度降低鳕鱼骨酶解液的苦味,并分析了水解物中的多肽与游离氨基酸对苦味的产生机制。结果表明通过木瓜蛋白酶适度水解2 h,鳕鱼骨酶解液水解度达到7.48%,苦味值为5.80,并且多肽主要分布在1500~2000 Da;另外,第一次酶解后将沉淀进行高压蒸煮热处理(121℃,30 min),使鱼骨表面变得松散,再次添加混合酶对沉淀进行酶解,以实现鳕鱼骨的深度水解,水解度达到49.24%,水解物中多肽分子量较小,主要分布在500~1000 Da,苦味值为6.03,游离氨基酸显著高于仅一次水解后的含量。通过控制水解度从而限制了苦味的产生,这种低苦味酶解肽的制备为其在食品中的应用奠定了基础。 关键词:鳕鱼骨;酶解;低苦味;多肽;[详细]
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2022-07-25 11:22
期刊论文
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植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶联免疫分析
- 植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶联免疫分析使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)水平。用纯化的植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入苯丙氨酸解氨酶(PAL),再与HRP标记的植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的苯丙氨酸解氨酶(PAL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)浓度。植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶联免疫分析标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶联免疫分析操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。[详细]
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2018-09-19 10:00
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河蚌酶解液美拉德反应前后风味成分的分析
- 河蚌酶解液美拉德反应前后风味成分的分析[详细]
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2015-04-28 00:00
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Maillard 反应对豆粕酶解液挥发性风味成分的影响
- 摘要:采用GC-MS、电子鼻、感官评价方法,探讨Maillard反应对豆粕酶解物挥发性风味成分的影响。结果表明:样品SM-AR中富含醛类、含硫化合物、糠醛等与肉香味有关的Maillard反应产物,其种类和含量明显比样品SM-EH和样品SM-UAR的丰富;电子鼻检测结果发现,样品SM-AR的电子鼻响应值明显比其他2个样品的高,且7号、9号传感器比其他传感器有更高的响应值,说明样品SM-AR的挥发性成分中含硫化合物的气体较多;从PCA分析、LDA分析和感官评价均可看出样品SM-AR与其他样品间存在很大差异。[详细]
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2018-08-16 10:00
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酶解对脱脂牛乳蛋白抗原性及感官特性的影响---日本INSENT电子舌
- 摘要:以脱脂牛乳为原料,采用间接竞争酶联免疫吸附测定法和三(羟甲基)甲基-甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法研究碱性蛋白酶(Alcalase,AT)、复合蛋白酶(Protamex,PT)和风味蛋白酶(Flavorzyme,FT)处理对脱脂牛乳的抗原性、分子质量分布、滋味和色泽的影响。结果表明:AT对主要致敏乳蛋白的脱敏效果优于PT和FT(P<0.05),当酶底比为500 U/g、酶解时间为20 min时,其对α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和酪蛋白的抗原抑制率分别达到64.01%、76.00%和69.10%;AT、PT和FT处理后脱脂牛乳中低分子质量肽段明显增加,且苦味、涩味、苦后味、涩后味随酶解时间延长、酶底比的增加而升高,FT处理脱脂牛乳的滋味优于AT和PT;酶解脱脂牛乳的亮度值显著降低,红度值显著升高(P<0.05),透光性增加,AT处理脱脂牛乳的色泽更接近于牛乳。
关键词:脱脂牛乳;酶解;抗原性;滋味;色泽;[详细]
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2023-06-05 10:51
期刊论文
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大鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒
- 大鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒[详细]
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2013-12-11 00:00
选购指南
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小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒
- 小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒[详细]
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2013-12-09 00:00
其它
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人L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)检测试剂盒
- 人L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)检测试剂盒[详细]
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2024-09-28 00:19
选购指南
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植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)免疫分析说明书
- 植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)免疫分析说明书试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围:0.8U/L-20U/L使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)水平。用纯化的植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入苯丙氨酸解氨酶(PAL),再与HRP标记的植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的苯丙氨酸解氨酶(PAL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(40IU/L)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)免疫分析说明书操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。20U/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液10U/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液5U/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液2.5U/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液1.25U/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)免疫分析说明书保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月[详细]
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2024-09-30 21:18
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