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反转录是指在基因工程进行过程中,将RNA作为模板,将DNA遗传信息提取出来的过程。对于DNA生物合成而言,反转录是一种特殊的方式。将RNA作为模板,利用反转录酶,合成DNA的过程,即是反转录。
反转录酶活性
多种酶活性为大多数反转录酶所具有,分别为下述几种活性。
1、DNA聚合酶活性
利用RNA作为模板,对dNTP进行催化使DNA合成的过程。需要将RNA作为此酶为引物。色氨酸的tRNA占多数,DNA以5′→3′方向在引物tRNA3′-末端合成。反转录酶催化合成的DNA有比较高的出错率,因为3′→5′外切酶活性不为反转录酶所具备,即是校正功能其不具备。
2、RNase H活性
RNase H从RNA5′端将通过反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子的RNA分子水解掉。
3、DNA指导的DNA聚合酶活性
底物使用dNTP,模板使用反转录合成的第yi条DNA单链,再次将第二条DNA分子合成。
4、其他
另外,DNA内切酶活性还存在于某些反转录酶中,这也许和在宿主细胞染色体DNA中整合病毒基因相关联。
介绍
反转录酶,又叫做依赖RNA的DNA聚合酶(RDDP),其在反转录过程中起催化作用,就是利用RNA作为模板为DNA链的合成进行催化。
合成的DNA链叫做与RNA互补DNA(cDNA)。在一些RNA病毒中存在反转录酶,病毒的恶性转化可能与其相关。人类免疫缺陷病毒(HIV)亦是一种RNA病毒,反转录酶亦包含其中。反转录酶亦存在于小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中。推测细胞分化和胚胎发育可能与其相关。
作用
反转录酶的发现大大推动了遗传工程技术的发展,到目前为止,其作为一种工具酶,起到非常重要的作用。mRNA通过组织细胞被提取,并且将其作为模板,在反转录酶的作用下,将互补的DNA(cDNA)合成出来,通过这将cDNA文库(cDNA library)构建出来,从中将特异的目的基因筛选出来,使目的基因在基因工程技术中获得,其为Z常用的方法。
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