核酸PC抽提醇沉淀方法

核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在、输血安全、法医学鉴定、疾病控制ZX、临床疾病诊断、生物学研究等多种领域得到广泛地应用。

PC抽提/醇沉淀方法

PC(P是英文酚的缩写，C是英文氯仿的缩写)抽提/醇沉淀方法方便、经济、可靠、稳定，是一个永不过时的方法。PC抽提能够将蛋白质彻底去除，盐能够将醇沉淀，对于一般的干净的样品(杂质为蛋白质)，高质量的核酸完全能够通过此方法而获得。尽管每次PC抽提均会有一部分核酸(因为不可能将水相全部移取)损失，以及低浓度核酸的醇有着很低的沉淀效率，然而通过调整操作能够将这些问题的影响减少甚至解决。不适合大规模抽提是此方法Zda的问题。

去除蛋白质的一个非常有效的手段即是PC抽提，苯酚可以使蛋白质变性，从水相中能够析出变性后的蛋白质，在苯酚/水相之间或者苯酚中存在。用量充足以及彻底混匀为PC抽提的关键。只有彻底混匀，才可以使苯酚与蛋白质的充分接触得以确保，使蛋白质完全变性。不需要担心混匀的剧烈程度会对核酸，特别是基因组DNA造成破坏。剧烈的混匀操作，是会使大分子的基因组DNA被部分打断，然而该破坏作用不会强烈到DNA变成10kb以内的小片段。手剧烈晃动混匀后，大多数基因组DNA的片段均会超过20kb，除了一些特别的要求外，这个大小是完全适用于PCR和酶切。

如果要求非常大的片段，剧烈的混匀方法就不能够使用。而只能来回温和颠倒混匀。裂解液要有足够大的比例，使体系不要太粘稠是此事的关键。之所以要有充足的用量，是因为苯酚去除蛋白质是有一定的饱和度的。若超过了该饱和度，那么就不能一次去除裂解体系中的蛋白质，必须通过多次抽提，才能够去除彻底。

除此以外，体系太粘稠的的缺点是很难彻底去除蛋白质，并且基因组DNA会断裂得更加严重，因此需要对裂解液与样品的比例加以注意。4℃离心操作对于蛋白质彻底去除更加的有利。利用酸性酚能够将DNA部分去除的特点。在RNA抽提时获得DNA残留极少的RNA。值得注意的是，某些植物样品，在将某些杂质去除以前，PC抽提是不能使用的，不然一定会使核酸降解。