纯化线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

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• 纯化线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

  纯化线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2016-03-10 00:00

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• 纯化线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂盒

  主要用途纯化线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂是一种旨在通过钙黄绿素载入后离心处理或钴淬灭技术，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，而存在于或由线粒体释放到线粒体外的荧光染料，即刻发生荧光去除或淬灭，来分析和观察线粒体膜通道孔活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种纯化线粒体膜通道孔活性（瞬时或长期开放状态）的检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。技术背景线粒体膜通道孔（mitochondrialpermeabilitytransitionpore；MPTP）是由线粒体内外膜成分构成的非特异性且钙离子依赖性通道。在细胞凋亡或坏死时，线粒体内容物通过膜通道孔释放到胞浆中。膜通道孔的开放，显著改变线粒体的通透性。钙离子过度进入、线粒体谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等导致膜通道孔的持续开放，而造成细胞色素C的释放和线粒体膜电位的消失。钙黄绿素-AM，又称双甲亚胺二乙酸钠荧光素－乙酰氧基甲基酯【bis（bis-carboxymethylaminomethylfluorescein）-acetoxymethylester】，作为荧光探针：**，适宜的分子量622kd，小于1.5kd；第二，几乎不具有膜结合性；第三，不是线粒体酶的底物；第四，容易进入细胞及其线粒体。钙黄绿素-AM进入线粒体后，被内酯酶切离，产生具有极性的荧光性强的钙黄绿素，被线粒体俘获。同时线粒体外的钙黄绿素通过离心去除或受到其淬灭剂钴离子的淬灭。一旦线粒体膜通道孔瞬时开放，钙黄绿素释放出线粒体外，由于离心处理或被钴离子淬灭。线粒体内钙黄绿素荧光的变化，表明膜通道孔的开放状态。产品内容染色液（ReagentA）微升中和液（ReagentB）毫升保存液（ReagentC）毫升产品说明书1份保存方式保存染色液（ReagentA）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月用户自备黑色96孔板：用于线粒体荧光分析的容器1.5毫升离心管：用于线粒体染色的容器载波片/盖玻片：用于线粒体样品存放后荧光分析微型台式离心机：用于沉淀线粒体培养箱：用于染色孵育（共聚焦）荧光显微镜：用于线粒体荧光分析荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于线粒体荧光定量分析实验步骤直接法准备好待测的纯化线粒体样品移取100微升线粒体样品（总量为0.2毫克）到1.5毫升离心管加入xx微升染色液（ReagentA），混匀放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟，避免光照放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去上清液加入xx微升37℃预热的保存液（ReagentC），混匀颗粒群放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去保存液（ReagentC）小心加入xx微升37℃预热的保存液（ReagentC），混匀颗粒群选择下列方式之一进行操作：（A）使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：1）移取10微升上述悬液到载波片上，盖上盖玻片2）激发波长488nm，散发波长505nm――绿色荧光减弱，表明膜通道孔活性（MPTP）增强或使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：1）移取100微升上述悬液到100微升比色杯或黑色96孔板2）即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪：激发波长488nm，散发波长505nm――RFU降低，表明膜通道孔活性（MPTP）增强间接法实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（ReagentA）置入冰槽里融化，中和液（ReagentB）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（ReagentA）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升中和液（ReagentB），混匀后，标记为染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。准备好待测的纯化线粒体样品移取100微升线粒体样品（总量为0.2毫克）到1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去上清液加入xx微升含有染色液（ReagentA）和中和液（ReagentB）的染色工作液，充分混匀放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟，避免光照选择下列方式之一进行操作：使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：1）移取10微升上述细胞悬液到载波片上，盖上盖玻片（每隔5分钟检测一次，持续30分钟）2）激发波长488nm，散发波长505nm――绿色荧光减弱，表明膜通道孔活性（MPTP）增强或使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：1）移取100微升上述悬液到100微升比色杯或黑色96孔板2）即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪（每隔5分钟检测一次，持续30分钟）：激发波长488nm，散发波长505nm――RFU降低，表明膜通道孔活性（MPTP）增强[详细]

  2018-11-19 10:00

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• 纯化线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂盒产品说明书

  主要用途纯化线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂是一种旨在通过钙黄绿素载入后离心处理或钴淬灭技术，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，而存在于或由线粒体释放到线粒体外的荧光染料，即刻发生荧光去除或淬灭，来分析和观察线粒体膜通道孔活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种纯化线粒体膜通道孔活性（瞬时或长期开放状态）的检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。技术背景线粒体膜通道孔（mitochondrialpermeabilitytransitionpore；MPTP）是由线粒体内外膜成分构成的非特异性且钙离子依赖性通道。在细胞凋亡或坏死时，线粒体内容物通过膜通道孔释放到胞浆中。膜通道孔的开放，显著改变线粒体的通透性。钙离子过度进入、线粒体谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等导致膜通道孔的持续开放，而造成细胞色素C的释放和线粒体膜电位的消失。钙黄绿素-AM，又称双甲亚胺二乙酸钠荧光素－乙酰氧基甲基酯【bis（bis-carboxymethylaminomethylfluorescein）-acetoxymethylester】，作为荧光探针：**，适宜的分子量622kd，小于1.5kd；第二，几乎不具有膜结合性；第三，不是线粒体酶的底物；第四，容易进入细胞及其线粒体。钙黄绿素-AM进入线粒体后，被内酯酶切离，产生具有极性的荧光性强的钙黄绿素，被线粒体俘获。同时线粒体外的钙黄绿素通过离心去除或受到其淬灭剂钴离子的淬灭。一旦线粒体膜通道孔瞬时开放，钙黄绿素释放出线粒体外，由于离心处理或被钴离子淬灭。线粒体内钙黄绿素荧光的变化，表明膜通道孔的开放状态。产品内容染色液（ReagentA）微升中和液（ReagentB）毫升保存液（ReagentC）毫升产品说明书1份保存方式保存染色液（ReagentA）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月用户自备黑色96孔板：用于线粒体荧光分析的容器1.5毫升离心管：用于线粒体染色的容器载波片/盖玻片：用于线粒体样品存放后荧光分析微型台式离心机：用于沉淀线粒体培养箱：用于染色孵育（共聚焦）荧光显微镜：用于线粒体荧光分析荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于线粒体荧光定量分析实验步骤直接法准备好待测的纯化线粒体样品移取100微升线粒体样品（总量为0.2毫克）到1.5毫升离心管加入xx微升染色液（ReagentA），混匀放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟，避免光照放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去上清液加入xx微升37℃预热的保存液（ReagentC），混匀颗粒群放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去保存液（ReagentC）小心加入xx微升37℃预热的保存液（ReagentC），混匀颗粒群选择下列方式之一进行操作：（A）使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：1）移取10微升上述悬液到载波片上，盖上盖玻片2）激发波长488nm，散发波长505nm――绿色荧光减弱，表明膜通道孔活性（MPTP）增强或使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：1）移取100微升上述悬液到100微升比色杯或黑色96孔板2）即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪：激发波长488nm，散发波长505nm――RFU降低，表明膜通道孔活性（MPTP）增强间接法实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（ReagentA）置入冰槽里融化，中和液（ReagentB）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（ReagentA）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升中和液（ReagentB），混匀后，标记为染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。准备好待测的纯化线粒体样品移取100微升线粒体样品（总量为0.2毫克）到1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心抽去上清液加入xx微升含有染色液（ReagentA）和中和液（ReagentB）的染色工作液，充分混匀放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟，避免光照选择下列方式之一进行操作：使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：1）移取10微升上述细胞悬液到载波片上，盖上盖玻片（每隔5分钟检测一次，持续30分钟）2）激发波长488nm，散发波长505nm――绿色荧光减弱，表明膜通道孔活性（MPTP）增强或使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：1）移取100微升上述悬液到100微升比色杯或黑色96孔板2）即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪（每隔5分钟检测一次，持续30分钟）：激发波长488nm，散发波长505nm――RFU降低，表明膜通道孔活性（MPTP）增强注意事项本产品为20次操作操作时，须戴手套染色前，所有试剂溶液，除染色液（ReagentA）外，需37℃预热建议染色完成后，即刻进行荧光检测分析孵育时，必须避免光照本产品友好使用于双重染色或重叠染色如果不具备505nm散发波长的滤波器，可以使用505nm至530nm中的任一波长如果黑色96孔板的背景读数过高，可以选择530nm散发波长如果膜通道孔为瞬时开放（transient），则荧光缓慢且自发降低本公司提供膜通道孔YZ剂：D0.2毫摩尔环胞素A（cyclosporineA）－12226，维护荧光完整本公司提供系列线粒体分析试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定荧光清晰[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 冰冻切片组织线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂盒产品说明书

  冰冻切片组织线粒体膜通道孔（MPTP）荧光检测试剂盒产品说明书[详细]

  2016-03-15 00:00

  实验操作

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• BEIZHUO 纯化线粒体膜通道孔（MPTP）比色法检测试剂盒产品说明书

  BEIZHUO纯化线粒体膜通道孔（MPTP）比色法检测试剂是一种旨在通过比色法检测线粒体的体积（膨胀性）变化，来实时分析和观察线粒体膜通道孔活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种纯化线粒体膜通道孔活性的检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 兔子线粒体膜通道孔（MPTP）elisa试剂盒试剂盒使用说明书

  兔子线粒体膜通道孔（MPTP）elisa试剂盒试剂盒使用说明书[详细]

  2014-02-24 00:00

  选购指南

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• 活体细胞线粒体膜通道孔（MPTP）红色荧光（TMRM）检测

  主要用途活体细胞线粒体膜通道孔（MPTP）红色荧光（TMRM）检测试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明甲酯染料，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，一旦释放到细胞浆，即刻发生荧光淬灭，来分析和观察线粒体膜通道孔活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种活体细胞线粒体（动物、人体、昆虫等）膜通道孔活性（开放状态）的检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。技术背景线粒体膜通道孔（mitochondrialpermeabilitytransitionpore；MPTP）是由线粒体内外膜成分构成的非特异性且钙离子依赖性通道。在细胞凋亡或坏死时，线粒体内容物通过膜通道孔释放到胞浆中。线粒体膜电位的去极化（depolarization），导致膜通道孔的开放，显著改变线粒体的通透性，使之线粒体膨胀（swel领），内容物释放。其中钙离子过度进入、线粒体谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等导致膜通道孔的持续开放，而造成细胞色素C的释放和线粒体膜电位的消失。四甲基罗丹明甲酯（tetramethylrhodaminemethylester；TMRM），为罗丹明衍生物阳离子染料，作为电势测定（potentiometric）荧光探针：**，具有亲脂性的；第二，与线粒体内膜负电极结合而聚集；第三，容易进入细胞及其线粒体。四甲基罗丹明甲酯进入细胞后，被细胞内酯酶切离，产生四甲基罗丹明。四甲基罗丹明进入线粒体后，被线粒体俘获，呈现强烈荧光。一旦线粒体膜通道孔开放，四甲基罗丹明释放出来而在胞浆重新分布，其荧光性显著降低。线粒体内荧光的变化，表明膜通道孔的开放状态。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书（中文版）

  纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2024-09-28 00:04

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• 细胞线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞线粒体内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2016-03-15 00:00

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• 细胞DNA损伤彗星完全荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞DNA损伤彗星完全荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-05-12 00:00

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• 细胞内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-03-30 00:00

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• 组织内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

  组织内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途组织内质网内钙离子浓度荧光检测试剂是一种旨在通过内质网钙离子特异性荧光探针Mag-Fluo--AM，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定内质网中总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织（动物、人体等）内内质网钙离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。技术背景钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calciumfluorophosphateapatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexedcalcium）和离子钙（ionizedcalcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscularexcitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。在细胞内，钙离子主要储存在线粒体和内质网等细胞器中。其中内质网钙离子储存在控制细胞活化、调控信号通路、蛋白分子转录后修饰，维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。内质网钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flamephotometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求，以及需要内质网纯化。Mag-Fluo--AM染料是一种钙离子低亲和性的荧光标记染料，特异性地由内质网捕获，可以检测内质网内的游离钙离子浓度的变化。在荧光分光光度仪下，激发波长490nm，散发波长525nm，来定量测定内质网的钙浓度。[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 细胞/组织高质纯化溶酶体（lysosome）分离试剂盒产品说明书（中文版）

  细胞/组织高质纯化溶酶体（lysosome）分离试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-01-19 00:00

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• 纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  纯化线粒体琥珀酸脱氢酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成电子受体染料，通过反应系统测定染料还原后峰值的降低，即采用比色法测算样品中单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体裂解悬液样品琥珀酸脱氢酶的特异性活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。技术背景琥珀酸脱氢酶（succinatedehydrogenase；SDH；EC1.3.99.1）是三羧酸循环（tricarboxylicacidcycle；TCA）或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素，位于线粒体内膜，参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反应，产生延胡索酸（furmarate），通过黄素腺嘌呤二核苷酸（FlavinAdenineDinucleotide；FAD）传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理，使用人工电子受体染料二氯靛酚钠（2,6-Dichloroindophenolsodium；DCIP），接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（ReducedflavinAdenineDinucleotide；FADH2）的电子，而被还原，在分光光度仪下，其吸光值（600nm波长）的变化，来测算琥珀酸脱氢酶的活性。其反应方式为：产品内容清理液（ReagentA）XX毫升裂解液（ReagentB）XX毫升缓冲液（ReagentC）XX毫升反应液（ReagentD）XX毫升底物液（ReagentE）XX毫升阴性液（ReagentF）XX微升产品说明书1份保存方式保存清理液（ReagentA）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；反应液（ReagentD）含有毒性物质，避免直接用手接触；底物液（ReagentE），避免光照；有效保证3月用户自备15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器4℃（微型）台式离心机：用于样品处理DOUNCE匀浆器：用于裂解组织恒温培养箱或恒温水槽：用于反应物孵育比色皿：用于比色测定的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；底物液（ReagentE）注意避光。然后进行下列操作。一、样品准备手术取出动物组织，并秤重以确定200毫克组织重量（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管（选择步骤）加入XX毫升清理液（ReagentA）清洗（选择步骤）抽去清洗液移入到一个液氮冻存管即刻放进液氮罐过夜次日从液氮罐里取出，即刻（Z快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）放进一个15毫升锥形离心管加入置于冰槽里的XX毫升裂解液（ReagentB）涡旋震荡5秒，充分混匀即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项8）将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为1500g小心移出上清液到另一个新的预冷的1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g小心抽去上清液加入XX微升裂解液（ReagentB），混匀颗粒群移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、测定准备准备好待测样品，置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长600nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零缓冲液（ReagentC）在室温下均衡温度背景对照测定移取XX微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿加入XX微升反应液（ReagentD）加入XX微升底物液（ReagentE）放进25℃培养箱里静置3分钟[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 精子DNA吖啶橙荧光检测试剂盒产品说明书

  精子DNA吖啶橙（acridineorange）荧光检测试剂盒产品说明书主要用途精子DNA吖啶橙（acridineorange）荧光检测试剂是一种旨在使用吖啶橙染料使单链和双链DNA呈现不同荧光，确定精子染色质质量或DNA损伤的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种动物或人体精子细胞以及冻存精子细胞。产品严格无菌，即到即用，操作简便，性能稳定，荧光清晰。技术背景在男科学（Andrology）中，精子（spermatozoa）分析提供了精子生成（spermatogenesis）、精子寿命、以及生育能力的基础信息。其中精子的活力（vitality）、运动能力（motility）、授精潜力（fertilizingpotential）、膜结构或染色质结构完整性（integrity）、顶体反应（acrosomalreaction）功能的评价是精子分析的重要指标，也是决定人工受孕或体外授精（invitrofertilization；IVF）的重要参数。精子DNA损伤或染色质质量是不育症的主要因素之一。使用阳离子三环胺荧光染料吖啶橙（Acridineorange；AO）染色技术，是精子染色质分析和授精效率评价的Z常用的方法。基于正常精子细胞的染色质完整性和DNA双链特性，作为DNA染色剂之一的吖啶橙与正常非变性DNA，即双链DNA嵌合（intercalate）时，呈现绿色荧光（激发波长488nm，散发波长530nm）；而与变性DNA，即单链DNA结合时，呈现红色荧光（激发波长488nm，散发波长630nm），以此定量分析精子质量或DNA损伤。产品内容清理液（ReagentA）毫升固着液（ReagentB）毫升染色液（ReagentC）毫升产品说明书1份保存方式保存清理液（ReagentA）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（ReagentC）避免光照，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于样品操作血细胞计数器：用于细胞计数载玻片和盖玻片：用于精子细胞爬片（共聚焦）荧光显微镜：用于观察染色的精子细胞细胞流式仪：用于分析染色的精子细胞实验步骤一、细胞流式仪分析1．移取新鲜获得的1毫升精液（30分钟至1小时内）到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g3．小心抽去上清液4．加入xx毫升清理液（ReagentA），混匀颗粒群5．在血细胞计数器上进行精子细胞计数：1×107精子细胞/毫升6．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g7．小心抽去上清液8．重复实验步骤4至7一次（不包括实验步骤5）9．加入xx微升染色液（ReagentB），混匀颗粒群10．室温下孵育10分钟，避免光照11．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g12．小心抽去上清液13．加入xx毫升清理液（ReagentA），混匀颗粒群14．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g15．小心抽去上清液16．重复实验步骤13至15一次17．加入xx毫升清理液（ReagentA），混匀颗粒群18．即刻进行细胞流式仪双通道分析：观察10000个细胞以上，200细胞/秒；激发波长200mW，散发波长16mW激发波长488nm488nm匹配荧光染料异硫氰酸荧光素（FITC）藻红蛋白（phycoerythrin；PE）荧光颜色绿色红色散发波长530630流式仪通道FL1FL3荧光增强正常精子DNA异常精子DNA19．细胞流式仪检测正常精子DNA（双链DNA）参考图像如下（X轴：FL3；Y轴：FL1；R1左下角为细胞碎屑；R2为正常精子细胞；R3为异常精子细胞；R4为未成熟精子细胞）二、荧光显微镜分析1．移取新鲜获得的1毫升精液（30分钟至1小时内）到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g3．小心抽去上清液4．加入xx毫升清理液（ReagentA），混匀颗粒群5．在血细胞计数器上进行精子细胞计数：1×107精子细胞/毫升6．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g7．小心抽去上清液8．重复实验步骤4至7一次（不包括实验步骤5）9．加入xx毫升清理液（ReagentA），混匀颗粒群10．即刻移取20微升到洁净的载玻片一端11．用盖玻片或另一个载玻片推片12．置于空气中凉干13．加上xx微升固着液（ReagentB），覆盖样品表面14．室温下孵育2小时15．小心抽去固着液16．小心加上xx微升染色液（ReagentC），覆盖样品表面17．室温下孵育5分钟，避免光照18．小心抽去染色液19．小心加上xx微升清理液（ReagentA），覆盖样品表面20．小心抽去清理液21．盖上盖玻片22．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下观察并计数（注意：每个视野计数200个精子）23．分析结果（参考图）观察红色荧光：滤波器激发波长488nm，散发波长630nm――可见黄色、桔红色至红色荧光，表明精子DNA损伤包括单链DNA观察绿色荧光：滤波器激发波长490nm，散发波长530nm――可见绿色荧光，表明精子DNA正常注意事项1．本产品为50次操作2．操作时须戴手套3．样品检测前，建议在血细胞计数器上进行精子细胞计数4．精子细胞计数时乘上稀释倍数104。标准血细胞计数器（Hemocytometer）的计算方法是：1毫米方块的细胞计数X104（稀释倍数）＝实际细胞数/毫升5．染色完成后，即刻进行检测分析，否则由于其毒性导致精子DNA异常6．如果流式细胞仪出现干扰，建议使用630nm散发波长，或进行补偿处理，建议使用诱导处理样品：10单位DNaseI/毫升37℃孵育10分钟或直接70℃孵育30分钟7．本产品常用于冻存精子细胞的检测分析8．本产品可以用于精子染色质结构分析（SpermChromatinStructureAssay；SCSA），分析参数如下：%DFI%HDS名词解释DNA断裂指数DNAFragmentationIndexDNA着色程度HighDNAStainability相同命名COMPαtHIGRN计算方法红色荧光：红色＋绿色荧光之比高亮绿色荧光参考值正常人：小于15％正常人：小于10％阈值：小于30％阈值：小于15％高生育力：0－15％中等生育力：16－27％低或差生育力：27－30％参数意义DNA损伤程度精子成熟程度9．本公司提供系列发育生物学相关检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定荧光清晰[详细]

  2018-11-18 10:00

  产品样册

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• 噬菌体培养试剂盒产品说明书（中文版）

  噬菌体培养试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-04-29 00:00

  安装说明

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• 粪便DNA高质纯化试剂盒产品说明书

  粪便DNA高质纯化试剂盒产品说明书主要用途粪便DNA高质纯化试剂是一种旨在经过标准分离法以后，由粪便（人体、动物等）中分离获得的DNA，进行二度亲和纯化，Zda限度地去除复杂又难以去除的蛋白、金属成分、杂质等非核酸类物质的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其应用于即时PCR、RLPF分析、测序、杂交、遗传鉴定、突变分析、性别鉴定、司法鉴定等。产品即到即用，性能稳定，操作简单，纯度出色，重复性好，堪称国际上同类产品**。技术背景粪便中含有许多污染成分，降解DNA和YZPCR反应。针对标准处理无法有效地去除顽固干扰因子的情况下，运用特殊亲和技术，达到高度纯化的效果。产品内容缓冲液（ReagentA）2毫升亲和液（ReagentJ）2毫升产品说明书1份保存方式保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于DNA纯化操作的容器微型台式离心机（例如EPPENDORF5415）：用于沉淀反应物恒温水槽：用于孵育反应物实验步骤1．准备好从1克粪便样品分离的DNA产物（100微克DNA总量）2．移入到1.5毫升离心管3．加入适量的缓冲液（ReagentA）到总容量为100微升4．加入100微升亲和液（ReagentB）（注意：使用前，先摇匀沉淀的亲和液（ReagentB））5．用手充分混匀6．放进56℃恒温水槽孵育30分钟，期间用手混匀一次7．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF5415）8．小心移出180微升上清液到新的1.5毫升离心管9．移出适量DNA溶液进行后续PCR反应或保存在－20℃冰箱里注意事项1．本产品为20次（1克粪便样品的DNA产物）操作或50次（200毫克粪便样品的DNA产物）操作2．操作时，须戴手套3．根据用户样品量大小，相应调整试剂用量4．亲和液（ReagentB）使用前，须摇匀5．建议使用粪便DNA分离试剂盒（HL20011.1）作为标准分离法操作6．本公司提供系列粪便核酸纯化试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定纯度优异[详细]

  2018-11-19 10:00

  产品样册

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• PCR产物纯化试剂盒说明书

  PCR产物纯化试剂盒说明书[详细]

  2016-05-25 00:00

  实验操作

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• PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒

  PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒[详细]

  2015-09-11 00:00

  标准

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• PCR 纯化试剂盒/DNA 纯化试剂盒

  PCR 纯化试剂盒/DNA 纯化试剂盒[详细]

  2014-12-11 00:00

  期刊论文

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