细胞培养时会遇到哪些问题？

1、细菌污染

常见的污染细菌有革兰氏阴性菌、大肠杆菌和假单胞菌等，革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。

2、真菌污染

真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在梅雨季节进行细胞培养更易污染。

细胞培养时需要提供 无菌环境：添加一定量的抗生素和两性霉素（青+链+两=三抗），防止微生物的污染。使用无菌培养皿、培养板等一次性耗材，减少污染的可能

（拓赫耗材，拓赫微生物培养耗材 ）

3、细胞生长缓慢，死细胞较多。

原因一：制备单细胞悬液时细胞活率和得率较低，到时初始活细胞较少。可以选择合适的单细胞悬液制备仪。

量少时的样本，尤其是临床穿刺，可以用每管处理量小的仪器（最少可以达到5mg）；量大时可以用每管处理量大的仪器（每管可达4000mg），选择合适的仪器进行制备，确保制备的单细胞悬液得率和活率都在较高水平。

原因二：培养基不合适，更换成熟的培养基，一些细胞的培养还会添加适量血清。

原因三：调整到最佳的培养条件，37±0.5℃（一些昆虫可能在25-28℃），7.2~7.4；二氧化炭培养箱等（开放式细胞培养中，需要5%的二氧化炭气体环境）。

4、支原体污染

支原体是一种大小介于细菌和病毒之间，最小直径0.2μm并独立生活的微生物。可用 酶离者MJ107支原体清除剂进行清除，用酶离者MJ108支原体检测试剂盒，进行支原体污染源检测。细胞培养时 使用支原体清除试剂擦拭培养箱及超净工作台、培养试剂中加入支原体清除试剂，尽可能使用一次性耗材及成品培养基。

5、黑胶虫污染

黑胶虫是细胞培养中一种常见的污染物。黑胶虫可能来源于血清，可用酶离者MJ106黑胶虫清除剂，进行清除。

细胞培养后的应用领域

培养后的细胞何去何从呢？可以做哪些研究呢？我们一起看一下吧。

①免疫学：单克隆抗体的自备、免疫细胞功能体外检测、淋巴细胞增殖测定、细胞因子的检测

②病毒学：细胞培养分离鉴定病毒、体外病毒的药效试验、抗病毒抗体的检测、病毒致病机制的研究

③药理学：药效检测、药物毒性的检测、抗肿瘤药敏感性检测、血糖药物的研究

④肿瘤学：细胞转化、浸润实验、癌基因及抑癌基因检测、肿瘤多药耐药基因检测、肿瘤基因表达产物检测

⑤遗传学：染色体畸变分析、微核试验、基因突变、DNA断裂检测

⑥农业：改造细胞遗传组成培育新品种、作物遗传种质的保存、提纯和复状

⑦生物工程：细胞转化、细胞融合、细胞脱核、基因转导、基因治疗、体细胞治疗等