会议提醒 | 基因疗法中的腺相关病毒（AAV）分析难点

2024-03-27 16:45:07 81阅读次数

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基因治疗通常需要有效的载体用于递送外源基因，在保护外源基因完整递送的同时也与特定细胞形成靶向的相互作用。腺病毒相关载体（AAV）是一类常见的基因治疗载体。

随着腺病毒作为基因治疗的药物运载载体不断地发展，需要更有效的分析方法来评估和确保聚集体等腺病毒的关键质量属性 (Critical quality Attributes, CQA) 能符合要求。

病毒颗粒聚集体作为产品相关杂质，是一项非常重要的纯度与杂质质量属性。由于形成聚集体可能会导致病毒载体的效力丧失与免疫原性的改变，所以需要对聚集体进行预防性的定量分析。

对AAV聚集体的测定通常采用超速离心法(Analytical Ultra Centrifugation, AUC)。但众所周知，AAV样品的量本来就非常有限，但AUC方法需要大量的AAV样品。在需要进行重复实验时，AUC的局限性使得分析进一步复杂化，并且利用有限的样品很难兼顾到额外的CQA 检测需求。体积排阻色谱法（SEC）是一种广泛应用的聚集体分析技术，并且已被证明可以作为AAV聚集体分析的有效解决方案。

在本文中，我们重点介绍了Biozen dSEC-7 SEC-FL解决方案，该方案可以在10分钟内进行稳定可靠的AAV聚集体分析，且仅需要0.5 μL样品。为了确定上样量对聚集体和单体间的分离度和聚集体检测的影响，我们将4种不同血清型(AAV2，5，8，9)分别以0.5-2μL之间的体积进样。

LC方法条件

色谱柱：Biozen 3μm dSEC-7

规格：150x4.6mm

货号：00F-4789-E0

流动相：20mM 磷酸钠,pH6.6+350mM 氯化钾

流速：350μL/min(等度)

温度：25℃

进样量：0.5μm，1μL，2μL

系统： UPLC

检测器：FLR-Ex 280nm，Em 350nm

进样频率：40Hz

样品：

1. AAV2-CAG-GFP，2E13vg/mL

2. AAV5-CMV-GFP，2E13 vg/mL

3. AAV8-CMV-GFP，2E13vg/mL

4. AAV9-CMV-GFP，2E13 vg/mL

在所有的进样体积条件下，AAV5、AAV9单体和聚集体分离度均在1.5和2.0之间。在所有不同上样量的实验中，聚集体的含量百分比均保持一致，说明Biozen dSEC-7色谱柱与高灵敏度的荧光检测相结合，可以在上样量低至0.5μL时也能提供准确的检测和分离。

图1. 不同上样量条件下AAV2单体和聚集体的分离

图2. 不同上样量条件下AAV5单体和聚集体的分离

图3. 不同上样量条件下 AAV8单体和聚集体的分离

图4. 不同上样量条件下 AAV9单体和聚集体的分离

Biozen dSEC-7通过优化的孔径和柱规格，以及增强的填料化学性质，提升了色谱柱分离度。这一系列的色谱柱能确保在不影响数据质量的前提下快速得出实验结果，使得研究人员能够自信地做出关键决策。较短的柱长和较窄的内径，不仅提升分析速度，更能节省宝贵的样品。

订购信息

Biozen?产品-生物兼容的硬件支持

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此外，飞诺美联合医麦客隆重邀请您参加《量“体”而出，”聚“焦基因疗法研究进程——使用新型尺寸排阻颗粒克服AAV聚集体分析的挑战》新品推介研讨会，会上，我们将向您逐步揭晓全新体积排阻色谱柱Biozen dSEC-7产品的独特性表现。我们还将和您一同探索多种血清型AAV在不同流动相及多种检测器的方法通用性的实际案例。2024年3月28日下午14点，期待和您一同见证这款产品的强大魅力！