生态环境部发布《水质 草甘膦的测定高效液相色谱法》

本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中草甘膦的测定。

规范性引用文件

《HJ 91.1 污水监测技术规范》、《HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范》、《HJ/T 164 地下水环境监测技术规范》。

方法原理

样品在 pH 为 4～9 的条件下加入二水合柠檬酸三钠，经过滤或固相萃取净化后与 9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC-Cl)进行衍生化反应，生成的荧光产物经二氯甲烷萃取净化去除衍生化副产物后，用具有荧光检测器的高效液相色谱分离检测。以保留时间和特征波长定性，外标法定量。

仪器和设备

1、高效液相色谱仪(HPLC)：具有荧光检测器。

2、色谱柱：填料粒径为5 μm，柱长250 mm，内径4.6 mm的十八烷基键合硅胶(C18)反 相色谱柱，或其它性能相近的色谱柱。

3、固相萃取柱：填料为二乙烯基苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物或十八烷基硅胶的萃取柱，或同等柱效的萃取柱，规格为500 mg/6 ml。 4、聚乙烯塑料(PE)管：10 ml。 6.5 水平振荡器。

6、涡旋振荡器。

7、棕色采样瓶：250 ml或500 ml带聚四氟乙烯衬垫的螺旋盖玻璃瓶或磨口瓶。

8、棕色样品瓶：2.0 ml带聚四氟乙烯衬垫的螺旋盖玻璃瓶。

9、一般实验室常用仪器和设备。

固相萃取净化

依次用 6 ml 甲醇(5.2)和 6 ml 水活化固相萃取柱(6.3)，保证小柱柱头浸润。量取10 ml 样品，加入 29.3 mg 二水合柠檬酸三钠(5.10)，混匀后以约 3 ml/min(约 1 滴/秒)的流速通过固相萃取柱，收集净化后的样品，待衍生。

液液萃取净化

在衍生后的样品中加入 5 ml 二氯甲烷(5.3)，置于涡旋振荡器(6.6)上涡旋萃取 2 min，取水相层，经滤膜(5.18)过滤，收集 1 ml 滤液于棕色样品瓶(6.8)中，待测。

液相色谱参考条件

流动相A：乙腈(5.1)，流动相B：磷酸溶液(5.9)，梯度洗脱程序见表1;

流速：1.0 ml/min;柱温：30℃;进样量：20 μl;

激发波长：254 nm;

发射波长：以302 nm作为检测波长，以315 nm作为辅助定性波长。

工作曲线的建立

分别取适量的草甘膦标准使用液(5.17)，用水稀释，制备至少5个浓度点的标准系列，草甘膦的质量浓度分别为0 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L(此为参考浓度)。