食品中赭曲霉毒素 A 含量检测的免疫亲和柱法（Copure® 赭曲霉毒素 A 免疫亲和柱）

一、样品提取 

1、大米 称取粉碎后的大米 5.00 g（精确到 0.01 g）食品到 50 mL 离 心管，加 25 mL 70% 甲醇水溶液，振荡 30 min，4000 r/min 下离心 5 min，取上清液 5 mL 于 15 mL 离心管中，加 10 mL 磷酸缓冲液，混匀待净化。 

2、食用油 称取 5.00 g（精确到 0.01g）食用油到 50 mL 离心管，加 1 g NaCl，20 mL 70% 甲醇水溶液，振荡 30 min，4000 r/ min 下离心 5 min，取上清液 1 mL，加入 4 mL 水，混匀待 净化。 

3、酱油 称取 5.00 g（精确到 0.01 g）酱油到 50 mL 离心管，加 70% 甲醇水定容至 20 mL，超声 5 min，振荡 10 min，取上清液 1  mL，加入 4 mL 水，混匀待净化。

 4、葡萄干 称取搅碎 5.00 g（精确到 0.01 g）葡萄干到 50 mL 离心管， 加提取液（称取 150.0 g 氯化钠、20.0 g 碳酸氢钠溶于约 950  mL 水中 , 加水定容至 1 L）20 mL，超声 5 min，振荡 5 min， 4000 r/min 离心 5 min，取上清液 1 mL 到 4 mL 磷酸缓冲溶液， 混匀待净化。

 5、白酒 取白酒 5.00 g（精确到 0.01 g）到 50 mL 离心管，加碳酸氢 钠溶液（10 g/L）定容至 20 mL，振荡 15 min，取上清液 1 mL 到 4 mL 磷酸缓冲溶液，混匀待净化。 磷酸缓冲溶液：称取 8.0 g氯化钠、1.2 g磷酸氢钠、0.2 g磷酸二氢钾、0.2  g 氯化钾溶解于约 990 mL 水中 , 用浓盐酸调节 pH=7.0，用水稀释至 1 L。

 二、免疫亲和柱净化（Copure® 赭曲霉毒素 A 免疫亲 和柱，3 mL） 

上样：取待净化样品 2 mL 过柱，弃掉流出的液体。

淋洗和洗脱：加入 20 mL 水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流 出的液体，抽干小柱；加入 2 mL 甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速 约为 2-3 秒 / 滴。 

重新溶解：40℃下氮吹至近干，加 1 mL 初始流动相复溶，0.22  µm 滤膜过滤，供 HPLC 分析。

 三、仪器条件

设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：Inertsustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2475 荧光检测器 检测波长：激发波长 : 333 nm  发射波长 : 447 nm 流动相：A：乙腈   B：2% 乙酸水溶液 洗脱方式：等度洗脱，A：B=49.5：50.5 流速：1 mL/min 进样体积：20 µL 

四、实验结果 

表 1 25.0 μg/kg 食品中赭曲霉毒素 A 的添加回收结果