牛奶中黄曲霉毒素 M1 检测的免 疫亲和柱法（Copure® 黄曲霉毒素 M1 免疫亲和柱）

一、样品提取 

称取 4.0 g 牛奶样品，加 10 mL 甲醇涡旋 10 分钟，4℃下 6000 转冷冻离心 10 分钟，取 2 mL 提取液加 40 mL PBS 溶液 稀释待净化。 

二、免疫亲和柱净化（Copure® 黄曲霉毒素 M1 免疫亲 和柱，1 mL） 

上样：将 20 mL 上样器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液以 1-2 滴 / 秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。 淋洗和洗脱：加 10 mL水淋洗柱子，弃掉流出的液体；抽干小柱； 加入 4 mL 乙腈分两次缓慢洗脱，流速约为 2-3 秒 / 滴。 

重新溶解：在 40℃下氮吹至近干，加初始流动相定容至 1  mL，过 0.22 µm 滤膜，待上机测试。 

三、仪器条件 

设备：岛津 HPLC-30 A 色谱柱：Inertsil ODS-3 (2.1 mm×75 mm, 3 µm) 检测器：RF-20A 荧光检测器 检测波长：激发波长：435 nm 发射波长：365 nm 流动相：A：乙腈 B：水 洗脱方式：等度洗脱，A：B=25：75 流速：0.3 mL/min 进样体积：1 µL

 四、实验结果 

表 1 1.0 μg/kg 牛奶中黄曲霉毒素 M1 的添加回结果