蔗糖密度梯度离心法进行百日咳抗原的纯化
【himacCP-70NE超速离心机及P32ZT区带转头在疫苗生产中的应用】
百日咳是由百日咳杆菌引起的,具有高强度的传染性疾病。多数表现为剧烈阵发性咳嗽,病程长达2-3个月,甚至导致婴幼儿死亡,随着百日咳疫苗广泛接种,儿童发病率已明显下降。百日咳一直被认为是一种儿童疾病,但实际上Z常见青少年和成人,患者会将百日咳传染给其他家庭成员,尤其是婴幼儿。
百日咳的危害:绝大多数儿童可以战胜百日咳,但不到1岁的婴幼儿中被传染而导致严重疾病是常见情况。1:超过一半的婴幼儿必须住院ZL2:超过一半的婴幼儿会出现短暂的呼吸停止。3:8名幼儿中有1名出现肺炎。
如何预防百日咳?Z有效,Z经济的预防手段就是接种百日咳疫苗。
鉴于目前国家对百日咳疫苗要求非常严格,需要一种GX的、高质量的生产纯化方法,本文将介绍使用himac(前身为日立工机)超速离心机CP-70NE及P32ZT区带转头进行纯化的方法。
◆主机及转头:himac超速离心机CP-70NE及区带转头P32ZT
CP70NE P32ZT转头
◆himac超速离心机在GMP与FDA方面合规性:
√用户管理和密码锁控制
√电子签名
√实时运行曲线及记录
√远程监控和诊断
√仪器管理和运行数据记录
√运行备注(批号、追溯)
√转头运行追踪
√无粉尘及清洁设计
◆转头:区带转头P32ZT
◆离心条件:
上下样转速:2000rpm;运行转速:32000rpm;ZdaRCF:102000xg;时间:18小时;加速/减速速率:9加/7减;设置温度:2-8℃;蠕动泵速度50ml/min
密度梯度液:10%蔗糖溶液;30%蔗糖溶液;40%蔗糖溶液;0.9%灭菌生理盐水;百日咳抗原
◆离心步骤:
1.使用注射用水将分析纯级别蔗糖稀释,制作成10,30,40%的蔗糖密度梯度介质
2.按如下顺序将各梯度液用蠕动泵均匀缓慢泵入转头(转头运行2000rpm):
3.30%蔗糖溶液(1.381g/cm3) 550ml
10%蔗糖溶液(1.038g/cm3) 550ml
百日咳抗原 500ml
0.9%生理盐水90ml 90ml
总共 1690ml
4.离心时间结束后用40%蔗糖溶液从加样头边孔将目的抗原顶出
5.目的抗原收集:每100ml一管进行收集,共8个收集管
结果及结论:结果显示蔗糖密度梯度离心完成后收集到百日咳抗原所在区域。使用上述蔗糖密度梯度方法可以对大规模百日咳疫苗生产中抗原进行纯化,浓缩及后续的疫苗产品研究和工艺升级。
(来源:天美(ZG)科学仪器有限公司)
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