应用EZsepHLB固相萃取柱建立食品中三氯蔗糖的检测方法

三氯蔗糖是我国批准使用的甜味剂，其甜度约为蔗糖的600倍，甜味纯正，甜味特性与甜味质量和蔗糖十分相似。在一般食品加工和储存过程中都非常稳定，水溶性很好，适宜于各种食品加工过程。我国规定可用于饮料、酱菜类、复合调味料、配制酒、雪糕、糕点、饼干、面包等许多领域。

食品安全国家标准《GB 5009.298-2023 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》已于2024年3月6日实施，本文参照该标准，利用EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/6mL，货号：PZ12609）净化样品，再用高效液相色谱串联质谱检测进行检测，建立了食品中三氯蔗糖的分析方法。

关键词

三氯蔗糖；EZsep?；HLB固相萃取柱

1.1 仪器与试剂

MPREP-SPE08固相萃取装置，货号：PZ0008，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

4500质谱系统，SCIEX公司；

EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/6mL，货号：PZ12609），北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

冷冻离心机，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科学仪器厂；

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

正己烷（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

乙酸锌，亚铁氰化钾，乙酸等化学品均为分析纯或以上，购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2 工作液配制

三氯蔗糖标准储备液：100ug/mL，溶剂为水，购自坛墨质检标准物质中心；

三氯蔗糖标准工作液：取1.0mL标准储备液于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，得到浓度为10μg/mL标样工作液；

移取10μg/mL的三氯蔗糖标准工作液0.01、0.02、0.05、0.1、0.2mL，分别置于1mL容量瓶中，用水定容至刻度，得到浓度依次为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0μg/mL的标准系列工作液。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

准确称取酱油和糕点样品各2g（精确至0.001g）于50mL离心管中，加人10mL水，涡旋混合器上振荡3min，加人1.0mL乙酸锌溶液和1.0mL亚铁氰化钾溶液，超声波提取20min，8500r/min冷冻离心5min，取上清液于25mL容量瓶中，再用10mL水重复提取1次，合并提取液后加水定容至刻度，混匀后转移至50mL离心管，加人15mL正已烷，涡旋混合器上振荡3min，8500r/min离心5min，弃去上层正已烷层，下层清液待净化。

1.3.2 固相萃取净化

EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/6mL，货号：PZ12609）依次用4mL甲醇、4mL水进行活化，取10mL1.3.1待净化液上样，上样结束后用3mL10%甲醇水溶液淋洗萃取柱，再用3mL甲醇洗脱萃取柱，收集全部洗脱液，然后用水定容至10mL容量瓶中，混匀过微孔滤膜后供LC-MS/MS测定。

1.3.3 LC-MS/MS仪器条件

色谱柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）

检测方式：多反应监测（MRM）

流动相：A：水 B：甲醇（梯度洗脱程序见表1）

流速：0.6mL/min

进样量：1μL

表1 梯度洗脱程序

表2 加标回收率结果

图1 三氯蔗糖标准溶液色谱图

图2 酱油加标样品色谱图

图3 糕点加标样品色谱图

本实验使用EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/6mL，货号：PZ12609）对食品中三氯蔗糖进行净化，通过高效液相色谱串联质谱进行测定，该方法的加标回收率在86.0%~94.3%之间，RSD在2.1%~2.8%之间，满足标准要求。实验结果也表明EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/6mL，货号：PZ12609）能很好的完成方法中的净化工作，并且结果稳定、可靠。

[1] 《GB 5009.298-2023 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》