精准测定面粉过氧化苯甲酰，把关面粉安全

过氧化苯甲酰，简称为BPO，可用于漂白剂、氧化剂，其使用在小麦粉中，可以起到漂白作用。本案例参考《 GB/T 22325-2008 小麦粉中过氧化苯甲酰的测定 高效液相色谱法》，使用日立Chromaster PLUS液相，配置DAD检测器，对小麦粉中过氧化苯甲酰含量进行测定。

称取5 g样品（精确至0.1mg）于50mL比色管中，加入10mL甲醇，涡旋振荡1 min，静置5min，加入5 mL 质量浓度为50%的碘化钾溶液，涡旋振荡1 min，静置10 min，加水至50.0 mL，混匀，静置，吸取上层清液，过0.22 μm滤膜，待测试。

仪器配置：Chromaster PLUS 5160泵，5280自动进样器，5310柱温箱，5430二极管阵列检测器；

色谱柱：

HITACHI LaChromⅡ C18 (5μm,4.6mm×250mm)；

流动相：A：甲醇，B：0.02 mol/L乙酸铵溶液，等度；

流速：1.0 mL/min；

柱温：40℃；

进样量：10μL；

对苯甲酸标准溶液进行测定，得到的色谱图与光谱图如图所示

测得的标准曲线如下图所示，在5～80μg/mL的浓度范围内，小麦粉基质对照品工作曲线的线性相关系数R²为0.9999，线性良好。

将浓度为40μg/mL的小麦粉基质对照品溶液连续测试6次，得到的重叠色谱图如下图所示，重现性结果表如表所示。结果表明，保留时间RSD（%）为：0.05；峰面积RSD（%）为：0.02，重现性良好。

小麦粉基质对照品溶液的重叠色谱图（n=6，浓度为40μg/mL）

小麦粉基质对照品溶液重现性表（n=6，浓度为40μg/mL）

以浓度为5μg/mL的小麦粉基质对照品溶液色谱图作为参照，测试检出限（S/N=3）为0.04 mg/kg,定量限（S/N=10）为0.15 mg/kg。

市售低筋面粉样品测得的色谱图如下图B色谱图所示，未检出苯甲酸；同时对低筋面粉样品进行了加标实验，浓度为5 mg/kg与40 mg/kg。测得低筋面粉样品与加标样品的重叠色谱图如图所示。加标回收率结果见下表，回收率在98%～104%的范围内，证明测定结果准确。

低筋面粉与加标样品（加标浓度5 mg/kg）重叠色谱图

市售中筋面粉样品测得的色谱图如下图中B色谱图所示；同时对中筋面粉样品进行了加标实验，加标样品理论浓度为5 mg/kg与40 mg/kg。测得中筋面粉与加标样品的重叠色谱图如下图所示。加标回收率结果见下表，在标准要求的回收率101%～104%范围内，满足标准要求。

中筋面粉与加标样品（加标浓度5 mg/kg）重叠色谱图

低筋面粉与中筋面粉样品加标回收率结果

该实验使用日立Chromaster PLUS高效液相色谱仪，配四元梯度在线洗脱的输液泵、自动进样器、柱温箱和二极管阵列（DAD）检测器，根据《 GB/T 22325-2008 小麦粉中过氧化苯甲酰的测定 高效液相色谱法》，建立了高效液相色谱测定小麦粉中过氧化苯甲酰的方法，并对市售小麦粉样品进行了测定。

^{结果表明，该方法可以对小麦粉中过氧化苯甲酰进行分离、定性和定量分析；在5～80 μg/mL的浓度范围内，标准曲线的线性相关系R2}为0.9999，线性良好；且该方法测得过氧化苯甲酰保留时间RSD（%）为：0.05；峰面积RSD（%）为：0.02，重现性良好。并且使用该方法对市售小麦粉样品进行了测定，在样品中未检出过氧化苯甲酰，检出限可达0.04 mg/kg；同时对样品进行了加标回收率实验，回收率在98%~104% 范围内，证明该方法准确可靠。 

Chromaster PLUS

高效液相色谱仪