荧光Dr.赛小课堂｜活细胞ROS全景观测--荧光探针标记策略

我试着用活性氧（ROS）指示染料标记我的细胞，但没有观察到信号的明显差异。该如何解决呢？

首先确保您同时拥有一个阴性（未处理）和一个阳性（ROS诱导）样本进行比较。100 μM甲萘醌（Menadione）1小时或是50 μM奈法唑酮（Nefazodone）24小时可以作为很好的阳性对照。H₂O₂ 虽然不能很好地与CellROX染料兼容，但也可以用于阳性对照。其次，某些如H2DCFDA的染料需要酯酶切割，所以不能在血清（血清中包含的酯酶可过早切割染料）存在的情况下进行染色。如果您的阳性对照相对于阴性对照没有明显变化，尝试着增加染料浓度和标记时间。进行活细胞成像时尽可能得快。只有两种染料（CellROX Green和CellROX Deep Red）经甲醛固定处理后能保留在样品中。最后，确保您使用的滤光片和仪器设置与染料的激发和发射光谱相匹配。

ROS检测试剂能不能用于石蜡、冰冻组织检测？

由于大部分活性氧族是属于一过性物质，可能产生后随机与生物大分子反应，从而无法保留。

ROS检测试剂能不能用于活着的组织？

我们未验证过，但是有一些文献是有在胚胎组织、斑马鱼、线虫等模型中使用，具体应用还需再参考文献。

参考文献（上下滑动查看更多）

1)Saniya Arfin, Niraj Kumar Jha, et al.(2021). Oxidative stress in cancer cell metabolism. Antioxidants, https://doi.org/10.3390/antiox10050642

2)Yin, H., Xu, L., Porter, N. A., et al. (2022). Guidelines for measuring reactive oxygen species and oxidative damage in cells and in vivo. Nature Metabolism, https://doi.org/10.1038/s42255-022-00591-z

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