构建 CD133转染细胞株研制特异性抗体
摘要
本研究旨在通过构建CD133转染细胞株，研制特异性抗体。实验通过基因克隆、转染及筛选策略，成功构建了表达CD133的稳定细胞株。随后，利用该细胞株免疫小鼠，成功获得了高特异性的CD133抗体，为肿瘤免疫治疗及肿瘤标志物的检测提供了新的工具和思路。
引言
CD133作为干细胞及肿瘤干细胞的标志物，在肿瘤生物学研究中具有重要意义。它的表达与肿瘤发生、转移、耐药性等密切相关，因此，开发针对CD133的特异性抗体，既可以为肿瘤免疫治疗提供新的思路，也有助于肿瘤标志物的检测与诊断。目前，针对CD133的抗体研发仍面临一些挑战，如抗体特异性差、检测灵敏度低等问题。本研究通过构建CD133转染细胞株，进一步筛选与CD133特异性结合的抗体，为相关研究提供了一种新的工具。
实验部分
材料与试剂
本实验使用的CD133基因克隆载体由某试剂提供，转染试剂采用某试剂，抗体筛选使用某试剂。此外，使用威尼德电穿孔仪进行细胞转染，其他常规试剂如RPMI-1640、FBS等均为常见生物试剂。CD133基因克隆与载体构建
为了获得高效表达CD133的转染细胞株，首先通过RT-PCR从人类正常组织中提取RNA，并用特异性引物扩增CD133基因。扩增的CD133基因片段经过酶切处理后，克隆至合适的表达载体中。载体成功构建后，通过测序验证了克隆的正确性。细胞转染与筛选
选择HEK293T细胞进行CD133基因转染。采用威尼德电穿孔仪按照最佳转染条件进行电转染。转染后，通过抗生素筛选获得稳定表达CD133的细胞株。筛选过程通过流式细胞术检测CD133的表达水平，确保所筛选的细胞株具有较高的CD133表达。免疫小鼠免疫接种
为了获得特异性的抗体，将稳定表达CD133的细胞株与Freund’s完全佐剂混合，进行免疫小鼠接种。接种后，根据小鼠的免疫反应情况，定期采集血清并通过ELISA检测抗CD133抗体的产生。抗体筛选与鉴定
通过ELISA、Western blot和流式细胞术等方法，筛选出能够与CD133特异性结合的抗体。经反复验证，最终确定了两种具有较高特异性和亲和力的抗CD133单克隆抗体。这些抗体在细胞及组织切片中的表达具有显著的特异性和灵敏度。抗体特异性与亲和力分析
使用免疫沉淀法和竞争性ELISA进一步评估了筛选到的抗体的亲和力与特异性。通过表征抗体与CD133的结合动力学，验证了抗体的高亲和力及其对CD133的高度选择性。
营销部分
在此过程中，使用威尼德电穿孔仪进行了高效的细胞转染，确保了转染的高效性和细胞存活率。威尼德电穿孔仪凭借其精准的操作性和强大的功能，成为细胞转染实验中的重要工具。与其他电穿孔仪相比，威尼德设备提供了更加稳定和可靠的转染效果，尤其适用于高要求的细胞株构建工作。
同时，使用某试剂提供的转染试剂能够显著提高细胞转染的效率与稳定性，特别是在大规模细胞培养和抗体筛选的过程中表现出了其优异的性能。该试剂能够有效提升CD133基因的转染效率，确保研究结果的可靠性，为实验人员节省了大量的时间和精力。
通过本研究开发的CD133转染细胞株和特异性抗体，不仅为肿瘤研究提供了更加高效的实验工具，还将为临床抗肿瘤免疫治疗的研究提供新的方向。作为一种具有潜力的癌症免疫治疗靶点，CD133抗体在精准医疗中的应用将具有重要的价值。
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- 构建 CD133转染细胞株研制特异性抗体
- 本研究旨在通过构建CD133转染细胞株，研制特异性抗体。实验通过基因克隆、转染及筛选策略，成功构建了表达CD133的稳定细胞株。
-
- 人源性肝细胞生长因子转染细胞株的构建
- 从 HGF 生物学功能引入，介绍构建其转染细胞株的材料、方法、检测分析，为探究 HGF 机制和疾病治疗提供工具。
-
- 构建人HVEM基因转染细胞株促 T 细胞
- 构建人 HVEM 基因转染细胞株对 T 细胞的促进作用。详述实验流程，涵盖细胞株选取、HVEM 基因克隆、转染方法、T 细胞共培养及功能检测等环节，旨在揭示其免疫调节机制，为免疫治疗开拓新路径。
-
- CD244基因转染细胞株构建及单克隆抗体制备研究
- 通过构建CD244基因转染的稳定细胞株，并基于此制备特异性单克隆抗体。实验采用电穿孔仪（威尼德）完成基因转染，筛选获得高表达细胞株；通过免疫动物及杂交瘤技术获得抗体
-
- 构建组织型纤溶酶原激活剂突变体转染细胞株
- 构建组织型纤溶酶原激活剂（tPA）突变体基因转染细胞体系，采用定点突变技术优化tPA性能，通过HEK293与CHO细胞系进行转染，获得稳定表达的细胞株，并验证其在体内外的溶栓性能。
-
- 人源性肝细胞生长因子稳定转染细胞株构建研究
- 构建稳定表达人源性肝细胞生长因子（HGF）的细胞株。通过分子克隆技术构建HGF表达载体，利用威尼德电穿孔仪将其转染至HEK293细胞中。
-
- 人CD160基因转染细胞株构建及其生物学功能研究
- 分子克隆技术构建人CD160基因过表达载体，利用威尼德电穿孔仪转染HEK293T及Jurkat细胞系，筛选获得稳定转染细胞株。
-
- 稳定转染细胞外基质磷酸糖蛋白细胞株构建及其粘附特性研究
- 通过威尼德电穿孔仪介导的基因转染技术，成功构建稳定表达细胞外基质磷酸糖蛋白（PPG）的HEK-293细胞株。
-
- 反转录病毒介导Luciferase基因稳定转染细胞株构建及生物发光成像研究
- 反转录病毒介导的Luciferase基因稳定转染细胞株，并利用生物发光成像技术进行验证。通过反转录病毒感染、筛选及生物发光成像分析，成功获得了稳定表达Luciferase的细胞株。
-
- 最新发布！《双特异性抗体工艺解决方案》
- 文末扫码即可免费获取《双特异性抗体工艺解决方案》
-
- 双特异性抗体副产物去除干货分享
- BsAb的复杂结构带来了多种纯化挑战，但通过合理的设计和纯化策略，可以有效提高目标BsAb的纯度和产量。这些策略包括亲和层析、离子交换层析、复合模式层析和疏水层析等。
-
- LIGHT基因转染株单克隆抗体研制与效应
- LIGHT 基因转染株单克隆抗体研制及其效应探究。通过严谨筛选转染细胞、优化抗体制备流程、采用多元技术剖析，历经系列精细实验，深度揭示抗体特性与生物学效应，为肿瘤、免疫疾病治疗开拓新思路，助力相关领域
-
- LGR5基因克隆与细胞株构建的高效策略研究
- 通过高效的基因克隆技术与细胞株构建策略，成功建立LGR5基因过表达细胞模型，为后续LGR5在肿瘤发生与发展中的功能研究提供基础。采用聚合酶链式反应（PCR）技术克隆LGR5基因，并构建适合的表达载体。
-
- 雌激素响应稳转细胞株构建及调控机制研究
- 慢病毒载体介导的基因整合技术，成功构建了基于雌激素响应元件（ERE）的稳转细胞株（ER-SC）。实验表明，ER-SC在17β-雌二醇（E2）刺激下荧光报告基因表达强度提升12.3倍。
-
- 建立稳定转染周期性马来丝虫基因的细胞株
- 研究通过电穿孔法将携带周期型马来丝虫基因的重组质粒导入哺乳动物细胞，利用某试剂抗生素筛选获得稳定转染单克隆株。
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布，观点仅代表作者本人，不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们立即通知作者，并马上删除。
②凡本网注明"来源：仪器网"的所有作品，版权均属于仪器网，转载时须经本网同意，并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱：hezou_yiqi
上海计呈教学设备有限公司
沪公网安备 31011502008050号
参与评论
登录后参与评论