大鼠谷胱甘肽还原酶(GSR)ELISA试剂盒实验说明书

　　大鼠谷胱甘肽还原酶(GSR)ELISA试剂盒实验说明书

　　BS-3507大鼠谷胱甘肽还原酶(GSR)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠谷胱甘肽还原酶(GSR)活性。
将抗大鼠GSR抗体包被于微孔板中，加入待测样本后，样本中的GSR与包被抗体结合。随后加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(SABC)后，通过TMB底物显色，在450nm波长下测定吸光度(OD值)，OD值与样本中GSR浓度呈正相关。

　　二、试剂盒组成

　　组分 48孔配置 96孔配置 保存条件

　　预包被酶标板 8×6条 8×12条 2-8℃

　　标准品(冻干) 1支 1支 2-8℃

　　标准品/样品稀释液 10mL 15mL 2-8℃

　　生物素化检测抗体 60μL(100×) 120μL(100×) -20℃

　　生物素化抗体稀释液 6mL 12mL 2-8℃

　　SABC复合物 6mL 12mL 2-8℃

　　TMB显色液(A/B) 各3mL 各6mL 避光2-8℃

　　终止液 6mL 12mL 2-8℃

　　20×浓缩洗涤液 30mL 60mL 室温

　　封板膜 2片 4片 室温

　　说明书 1份 1份 -

　　三、样本处理

　　血清/血浆样本‌：

　　全血室温静置2小时或4℃过夜，1000g离心20分钟，取上清。

　　避免溶血或高血脂样本，2-8℃可保存48小时;长期保存需-20℃或-80℃，避免反复冻融。

　　组织/细胞样本‌：

　　组织匀浆或细胞裂解后，离心取上清，蛋白浓度调整至推荐范围。

　　四、实验步骤

　　洗涤液配制‌：

　　将20×浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍(如1mL浓缩液+19mL蒸馏水)。

　　标准品稀释‌：

　　取7支离心管，标注1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、空白(Blank)。

　　每管加入200μL标准品/样品稀释液，首管加入200μL标准品原液，混匀后逐级稀释。

　　加样与孵育‌：

　　每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。

　　弃去液体，洗涤3次(每次浸泡1-2分钟)。

　　酶标抗体反应‌：

　　每孔加入100μL生物素化检测抗体(按1:100稀释)，37℃孵育60分钟。

　　洗涤3次。

　　SABC复合物反应‌：

　　每孔加入100μL SABC复合物，37℃孵育30分钟。

　　洗涤3次。

　　显色与终止‌：

　　每孔加入90μL TMB显色液(A/B液等量混合)，避光37℃孵育15分钟。

　　每孔加入50μL终止液，混匀后立即测定。

　　五、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标(X)，OD值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。

　　根据样本OD值代入标准曲线方程，计算GSR浓度。

　　六、注意事项

　　试剂保存‌：

　　标准品、生物素化抗体需-20℃保存，避免反复冻融;其他组分2-8℃保存。

　　样本处理‌：

　　避免使用溶血、高血脂或浑浊样本;组织样本需充分匀浆。

　　操作规范‌：

　　移液需精确，避免交叉污染;洗涤需彻底，残留液体影响结果。

　　仪器校准‌：

　　酶标仪波长需校准至450nm，空白孔调零。

　　安全防护‌：

　　终止液含硫酸，操作时佩戴手套和护目镜。

　　七、预期结果

　　灵敏度：可检测低至0.156ng/mL的GSR。

　　线性范围：0.156-10ng/mL。

　　八、应用范围

　　本试剂盒适用于大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清液中GSR的定量检测，仅限科研用途。

　　提示‌：具体操作请以实际试剂盒说明书为准，实验前需阅读完整说明并确认组分完整性。