特色方案｜顶空-GC-MS/MS法测定动物类中药中三甲胺含量

创新性样品制备方法，有效消除三甲胺易挥发性对实验结果准确度的影响。

顶空进样结合GC-MS/MS测定，有效抑制了基质化学干扰，保证结果可靠性。

碱改性SH-Volatil Amin有效提升了对三甲胺的惰性，改善峰形及分析稳定性。

1.1 仪器

GCMS-TQ8050NX三重四极杆气相色谱-质谱联用仪

AOC-6000自动进样器

1.2 分析条件

顶空参数：

恒温炉温度：80 ℃

顶空针温度：100 ℃

平衡时间：30 min

GC-MS/MS参数：

色谱柱：SH-Volatil Amin, 30 m x 0.32 mm x 5.0 μm, P/N：R227-36326-01

柱温程序：40 ℃(0.5min)_20 ℃/min_200℃(5 min)

进样量：1 mL

进样方式：分流进样

分流比：10：1  

进样口温度：200 ℃

载气控制方式：恒流模式

柱流量：2 mL/min

离子化方式：EI

离子源温度: 200 ℃

色谱质谱接口温度 : 230 ℃

检测器电压：调谐电压+0.5kV

采集模式：MRM，离子对信息见表1

样品前处理

3.1 三甲胺标准溶液谱图

3.2 标准曲线和质量色谱图

使用5%三氯乙酸溶液配制三甲胺盐酸盐标准溶液系列, 浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0μg/mL(以三甲胺计)，精密量取各浓度标准溶液2mL分别置于预制好的顶空瓶石蜡层上部，压盖密封后，进 GC-MS/MS分析。以三甲胺浓度为横坐标，三甲胺定量离子对峰面积为纵坐标作标准曲线，标准曲线如图2 所示，线性相关系数如表2所示，三甲胺质量色谱图见图3。

3.3 重复性实验及检出限

取三甲胺盐酸盐标准溶液(以三甲胺计，0.1μg/mL) 2mL置于预制好的顶空瓶石蜡层上部，平行制备样品6份并连续进样，用于考察三甲胺峰面积的重复性，测定结果见表3。以3倍信噪比(峰至峰)计算检出限，三甲胺仪器检出限见表2。

3.4 加标回收率

三甲胺是动物类中药中内源性化合物，同时由于三甲胺的易挥发性，在本实验中，选择三甲胺盐酸盐标准溶液进行加标回收实验。美洲大镰中加标浓度分别为50和500mg/kg，按照前ER每个加标浓度平行制备3份加标样品，考察回收率和RSD。50mg/kg加标水平下，加标回收率分布在88.08%-103.63% 之间，RSD为 9.10%；500 mg/kg加标水平下，加标回收率分布在93.39%-97.08%之间，RSD为2.06%；详细结果见表4。

3.5 实际样品分析结果

选取产地不同的地龙、美洲大镰和水蛭为样品，按前述样品处理流程进行样品制备，并采用上述仪器条件测定，三甲胺检测结果如表5所示。

含-NH-的化合物容易和色谱柱熔融石英表面-Si-OH形成分子间氢键，容易导致色谱峰拖尾和柱上吸附，影响胺类分析结果准确性和重现性。

方法选择：对于甲胺、二甲胺、三甲胺检测一方面可以考虑离子色谱，另一方面可以考虑气相色谱，分析挥发胺相对更简单快速。

GC柱选择：如使用常规色谱柱，建议增大膜厚以改善对胺类惰性，但吸附问题无法彻底消除，因此更建议碱改性挥发胺专用柱，一方面通过碱改性真实提升对胺类惰性，另一方面高膜厚增加了对挥发胺保留，从而有效分离挥发胺。