Nature Commun/JEVS 双刊力作！超分辨 3D 外泌体分析系统，工程化外泌体激活 WNT 信号修复肝肠类器官

WNT信号通路是调节组织形态发生和再生的核心路径。WNT配体与RSPO蛋白作为强效共激活因子，在肝脏和肠道的干细胞稳态中起着关键作用。但天然蛋白存在稳定性差、易聚集等问题，研究团队因此开发了一系列工程化外泌体作为递送载体。但挑战随之而来：如何证明这些配体（如WNT3A、RSPO1）确实成功装载到了外泌体上？它们是包裹在内部还是锚定在表面？两个配体是在同一个外泌体上，还是分属于不同的囊泡？

研究组首先以一种名为Wntless (WLS)的八次跨膜蛋白作为外泌体骨架蛋白^[1]，增加了纯化外泌体上的WNT3A配体水平，提升了诱导WNT信号的活性。进一步实验证实，分别装载了RSPO1外泌体和WNT3A的外泌体具有协同作用，可增强WNT信号激活，诱导肝内胚层细胞向肝祖细胞的转变；RSPO1外泌体也能够调节肠道干细胞的增殖，支持肠道的再生。为确认RSPO1在外泌体上的定位，研究组使用dSTORM超分辨成像技术，在不透过及破坏外泌体膜结构的前提下，确定RSPO1位于外泌体的表面（图1）。这一发现为RSPO1通过与靶细胞表面受体直接结合而激活信号通路提供了坚实的形态学证据。

然而，在体内同步递送两种不同的外泌体具有挑战性，这凸显出了开发同时负载WNT3A和RSPO1的外泌体的必要性。因此，研究组构建了生产同时负载WNT3A和RSPO1的外泌体的细胞。为确认细胞分泌的外泌体同时含有两种蛋白，研究组再次使用dSTORM超分辨成像，证实了两种蛋白存在于同一外泌体上（图2）^[2]。

参考文献：

[1] Yang, L., Wang, S., Qiao, Z., Liu, Y., Wang, X., Liu, L., ... & Chan, Y. S. (2025). Dual-ligand engineered exosome regulates WNT signaling activation to promote liver repair and regeneration. Nature Communications, 16(1), 9019.

[2] Yang, L., Wang, X., Wei, X., Yu, P., Liu, Y., Wang, S., ... & Chan, Y. S. (2026). Oral Delivery of R‐spondin1‐Loaded Small Extracellular Vesicles Activates WNT Signalling Pathway to Accelerate Intestinal Injury Repair and Reverse Ageing. Journal of Extracellular Vesicles, 15(1), e70226.