赫施曼助力婴幼儿食品中左旋肉碱的测定

左旋肉碱是一种类氨基酸物质，人体自身可合成。但婴幼儿自身合成能力不足，其摄入主要依赖婴幼儿食品，是婴幼儿脂肪代谢与生长发育的关键营养素。而婴幼儿肝肾等代谢器官未成熟，左旋肉碱摄入过多会增加代谢负担，因此该类食品中左旋肉碱的含量直接关乎婴幼儿健康。

根据GB 5009.300-2025，测定婴幼儿食品中左旋肉碱含量的方法有三种：

一是分光光度法，原理：试样经过水提取，用高氯酸沉淀蛋白质后过滤。滤液中结合态的左旋肉碱经碱皂化游离出来，与乙酰辅酶A在乙酰肉碱转移酶的催化下反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶A。游离的辅酶A和5.5'-二硫双（2-硝基苯甲酸）反应生成黄色物质，其颜色深浅与游离的辅酶A含量成正比。因游离的辅酶A与左旋肉碱是等摩尔反应关系，可间接求出试样中左旋肉碱的含量。

二是柱前衍生-高效液相色谱法，原理：试样中的左旋肉碱经稀盐酸提取、碱皂化、乙腈沉淀蛋白后，用阳离子交换固相萃取柱净化。净化液中的左旋肉碱在氯甲酸丁酯、三乙胺的催化下与L-丙酰胺-β-萘胺发生衍生反应，衍生物用高效液相色谱仪测定，外标法定量。

三是液相色谱-串联质谱法，原理：试样用水溶解或稀释，经微波提取后，用液相色谱-串联质谱仪测定，同位素内标法定量。

三种方法的标准溶液配制内容如下：

一 分光光度法：

1.左旋肉碱标准储备液（1mg/mL）：准确称取10mg（精确至0.01mg）左旋肉碱置于10mL烧杯中，用赫施曼瓶口分配器加入5mL水溶解，全部转移至10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。将溶液转移至棕色容器中，4℃避光保存，有效期3个月。

2.左旋肉碱标准中间液（80μg/mL）：用Miragen电动移液器吸取左旋肉碱标准储备液2.00mL置于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。将溶液转移至棕色容器中，4℃避光保存，有效期1个月。

3.左旋肉碱系列标准工作液：用1mL规格的Miragen电子移液器移取0.125、0.50、1.00mL的左旋肉碱标准中间液分别置于25mL容量瓶中；再采用10mL规格的Miragen电子移液器，单吸多排模式，设置3个分液体积：2.00、3.00、5.00mL，将3个体积的左旋肉碱标准中间液分别置于于25mL容量瓶中；以上6个容量瓶均用水定容至刻度，混匀，即得。该系列标准工作液质量浓度分别为0.4、1.6、3.2、6.4、9.6、16μg/mL。临用现配。

二 柱前衍生-高效液相色谱法：

1.左旋肉碱标准储备液（1mg/mL）：同分光光度法（1）。

2.左旋肉碱标准中间液（10μg/mL）：用Miragen电动移液器吸取左旋肉碱标准储备液0.25mL置于25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀。临用现配。

3.左旋肉碱系列标准工作液：用20mL规格的赫施曼opus电子瓶口分配器，设置stepper模式，设置6个分液体积：0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00mL，将6个体积的左旋肉碱标准中间液分别置于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，即得。该系列标准工作液质量浓度分别为0.200、0.500、1.00、2.00、5.00、10.0μg/mL。临用现配。

三 液相色谱-串联质谱法

1.左旋肉碱标准储备液（20mg/mL）：准确称取200mg（精确至0.1mg）左旋肉碱置于10mL烧杯中，用瓶口分配器加入5mL水溶解，全部转移至10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。将溶液转移至棕色容器中，4℃避光保存，有效期6个月。

2.左旋肉碱标准工作液：用10μL规格的Miragen电子移液器，移取5个10μL左旋肉碱标准储备液（20mg/mL）置于10mL容量瓶中；再用10mL规格的赫施曼opus电子瓶口分配器，设置stepper模式，设置4个分液体积：0.25、1.00、2.00、2.50mL，将4个体积的左旋肉碱标准储备液（20mg/mL）分别置于10mL容量瓶中；以上6个容量瓶均用水定容至刻度，混匀，即得。该系列标准工作液质量浓度分别为10.0、20.0、500、2000、4000、5000μg/mL。左旋肉碱标准工作液（10.0μg/mL、20.0μg/mL）需临用现配；左旋肉碱标准工作液（500μg/mL、2000μg/mL、4000μg/mL、5000μg/mL）需4℃避光保存，有效期3个月。

3.同位素内标溶液（200μg/mL）：准确称取10mg（精确至0.1mg）左旋肉碱-d3置于10mL烧杯中，用瓶口分配器加入5mL水溶解，全部转移至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。将溶液转移至棕色容器中，4℃避光保存，有效期3个月。

4.左旋肉碱系列标准工作液：分别吸取上述各浓度的左旋肉碱标准工作液50.0μL于微波消解罐中，用Miragen电动移液器加入50.0μL同位素内标溶液，按照（5）中方法同法操作，即得。该系列标准工作液质量浓度分别为10.0、20.0、500、2000、4000、5000ng/mL。

5.固态试样：称取5.0g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加入40.0g水，涡旋混匀1min，超声5min溶解试样，冷却至室温，播匀，即得固态试样溶解液，称重。称取固态试样溶解液1.0g（精确至0.001g）于微波消解罐中，用Miragen电动移液器加入50.0μL同位素内标溶液、用瓶口分配器加5mL水和2.5mL硝酸，涡旋混匀，旋紧罐盖，置微波消解仪中进行提取（10min升至120℃，保持40min，最大功率1000W）。冷却后取出，缓慢打开罐盖排气，用水稀释至25mL，混匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，备用。用Miragen电动移液器吸取滤液0.50mL，加入乙腈0.50mL，混匀，供液相色谱-串联质谱仪测定。

液态试样：称取1.0g（精确至0.001g）试样于微波消解内罐中，用Miragen电动移液器加入50μL同位素内标溶液、用瓶口分配器加5mL水和2.5mL硝酸，涡旋混匀，旋紧罐盖，置微波消解仪中进行提取（10min升至120℃，保持40min，最大功率1000W）。冷却后取出，缓慢打开罐盖排气，用水稀释至25mL，混匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，备用。用Miragen电动移液器吸取滤液0.50mL，加入乙腈0.50mL，混匀，供液相色谱-串联质谱仪测定。

移取液体的一般是量筒和移液管，使用时敞口、操作环节多、效率较低，无法满足日益增加的液体移取的工作需求。

赫施曼的瓶口分配器采用阶梯式设计控制量程，应用机械化数字调节原理，确保分液量的高度准确、快捷，无人为误差。能够完成盐酸、硝酸、氢氟酸等强酸，以及碱液和有机试剂等多种液体的移取。特别适合大批量、重复性地分装同一种试剂。

实验室吸取小体积（几微升到10毫升）的液体，一般采用移液器。Miragen电子移液器，可设定吸液速度，按住吸液，松开即停，数值可在屏幕上实时显示，也可设定最da体积进行吸取。电机控制活塞运动，操作更加稳定和轻松。

还有赫施曼opus电子瓶口分配器，采用触摸屏显示和操作，简便易懂。分辨精度可达微升级别，一次装液可完成相同或不同体积的连续分液，非常适用于毫升级母液的添加与分液。大体积型号更能替代烧杯、玻璃棒、洗瓶等传统工具，实现稀释液的快速、精密添加，尤其适合标准曲线制备以及毫升级试剂的大批量灌装作业。