【柏恒科技GE4T PCR仪】“原位杂交”轻轻松松

01

原位杂交（in situ hybridization）是指将特定标记的已知核酸序列作为探针，与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸序列进行精确定量定位的过程。

原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

在原位杂交实验中，探针核酸如若与细胞或组织切片中核酸进行结合，需要精准的控制温度的变化。

02

1、制备探针：原位杂交的第一步是制备探针。探针是一段DNA序列，可以与目标DNA序列互补配对；

2、制备样品：样品可以是细胞、组织或染色体；

3、杂交：探针与样品中的目标DNA序列互补配对。杂交可以在液相中进行，也可以在固相中进行。液相杂交需要在高温下进行，以便探针可以与目标DNA序列杂交。固相杂交需要在低温下进行，以便探针可以与目标DNA序列杂交；

4、洗涤：需要将未杂交的探针从样品中洗掉，以便检测；

5、检测：需要检测探针是否与目标DNA序列杂交。

03

1、细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；

2、感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测；

3、癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；

4、基因在染色体上的定位；

5、检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等；

6、分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定，某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。

04

为了提高原位杂交的成功率可以采取以下措施：

1、 挑取优势菌落、选取新鲜的组织或者长势好的细胞。实验材料 的选用是直接影响原位杂交受否成功的关键；

2、 无菌操作。在生物安全柜或通风橱中进行实验操作，避免空气中或其他杂菌的污染，提高原位杂交成功率；

3、 使用适当的仪器和设备进行精准控温。在实验过程中，需要37℃培养以及4℃长期贮放，也需要低丰度标记核酸的特异性扩增，直至获得杂交反应的结果；

4、 抗生素的适配性。避免非特定标记核酸的杂交，减少原位杂交实验中的误差；

5、 硝酸纤维素膜使用质量好的。具有高蛋白结合能力和高机械强度、毛细管率与厚度一致、使用中不需要甲醇预湿等性能，获得高特异性的抗体，增加原位杂交成功率。

柏 恒 科 技