传统的细胞冻存方法,用在类器官上往往效果不佳。原因有三:
1. 三维结构的特殊性
类器官不是单层细胞,而是具有空间结构的细胞聚集体。冷冻保护剂需要渗透到核心才能发挥保护作用,而尺寸稍大的类器官,核心区域常常无法被有效保护。
2. 细胞类型的多样性
一个成熟的类器官可能包含多种细胞类型,不同细胞对冷冻的耐受性不同,复苏后容易出现“选择性死亡”。
3. 结构的脆弱性
冰晶的形成会破坏类器官内部的细胞间连接和基质结构,导致复苏后结构松散、功能丧失。
用普通细胞冻存液冻存类器官,结果往往是:复苏后类器官“散了架”,细胞活力低,结构不完整,无法继续培养。
Cebrary类器官冻存液针对类器官的三维结构特性量身打造。产品采用无血清、无动物源成分的配方,化学成分明确,有效降低外源因子污染风险。配合程序降温盒使用,操作简便、结果可重复。经测试,该产品支持肠、胃、肝、肺、胰腺等多种组织来源的类器官,复苏活率可达80%以上,在液氮中可实现长期稳定保存。
图1. CebraryCell freezing medium for Organoid 类器官冻存液产品示意图
以小鼠小肠类器官为例,冻存1个月、3个月、6个月后复苏,活率分别为88%、85%、82%。复苏后类器官形态完整,接种48小时恢复生长,72小时可见明显增殖,与新鲜培养类器官无明显差异。
图2. 小肠类器官冻存复苏效果
即使使用了专用冻存液,操作不当仍可能导致冻存失败。以下是几个常见问题及建议:
问题 | 表现 | 解决方案 |
类器官尺寸过大 | 直径超过600μm,复苏后核心区域细胞死亡 | 选择早期类器官(400-600μm)冻存,或冻存前适当消化;大尺寸类器官可适当延长冷冻保护剂孵育时间 |
复苏后未及时去除冻存液 | 复苏后细胞活力持续下降 | 复苏后立即用5-10倍体积预热培养基缓慢稀释,轻柔混匀后离心洗涤,重复一次 |
缺少ROCK抑制剂预处理 | 复苏后细胞凋亡率偏高 | 复苏后培养液中添加ROCK抑制剂(如Y27632),可显著提高存活率 |
反复冻融 | 冻存液效果批次间不稳定 | 首次溶解后分装成单次用量,避免反复冻融 |
产品名称 | 产品编号 |
41421ES | Cebrary?Cell recovery solution for Organoid 类器官回收液 |
41422ES | Cebrary?Cell freezing medium for Organoid 类器官冻存液 |
41423ES | Cebrary?Tissue Digestion Solution 组织消化液 |
41424ES | Cebrary? Tissue Storage Solution 组织保存液 |
41451ES | Cebrary? Organoid Rinsing Solution 类器官专用润洗液 |
40192ES | Ceturegel? Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free Plus 基质胶 |
翌圣生物
翌圣生物科技(上海)股份有限公司成立于2014年,是一家聚焦生命科学产业链上游核心原料,从事核苷酸、蛋白、细胞和类器官四大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业。公司兼备核心技术自主研发和规模化生产能力,核心产品数量达数千种,覆盖分子克隆、qPCR、NGS、体外转录、抗体、蛋白纯化及分析、细胞培养、转染、报告基因检测和类器官等多种系列,广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。
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